嘗試移植骨髓間充質干細胞治療大鼠糖尿病.pdf

1、目的近幾年，各國糖尿病發(fā)病率不斷上升，據2000年第17屆國際糖尿病大會調查的結果顯示，全世界的糖尿病患者數(shù)已超過1.51億。臨床上通常采用皮下注射胰島素來治療1型和部分2型糖尿病，其治療效果并不理想，且很難阻止糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生及發(fā)展。近20年來，國內外學者對胰腺移植及胰島移植做了大量的探索。對于已經喪失胰島細胞功能的糖尿病患者來說，植入胰島β細胞或其替代物被認為是最有效的方法。但供者細胞來源不足及免疫排斥反應等限制了這種方法的應用。

2、干細胞作為一類具有多向分化潛能的細胞，已經逐漸成為人們治療糖尿病的新希望。 骨髓間充質干細胞(MSC)來源廣泛，取材容易，便于自體移植，且在體外長期培養(yǎng)過程中，始終保持其多向分化潛能，遺傳背景穩(wěn)定，自體移植可避免免疫排斥反應，是理想的可供移植的種子細胞。探索人自身的骨髓間充質干細胞的細胞替代治療具有廣闊的應用前景，方法比較簡便，而且沒有倫理學和細胞來源的限制。 已有研究證實MSC移植入糖尿病大鼠體內，在胰腺發(fā)現(xiàn)了可分泌胰

3、島素的移植的MSC。但也有研究者認為沒有證據支持MSC在體內能分化成胰島β細胞。在本實驗中采用了新的方法，進一步驗證應用骨髓間充質干細胞治療糖尿病的可能性。我們嘗試首先建立大鼠糖尿病模型，再將BrdU標記的MSC移植入大鼠體內，監(jiān)測大鼠血糖和體重變化，并觀察MSC在糖尿病鼠體內微環(huán)境是否能向胰島β細胞分化，及其對糖尿病病情的恢復作用，為糖尿病治療提供理論基礎。 方法1大鼠MSC的分離培養(yǎng)和鑒定1.1無菌條件下取大鼠股骨和脛骨骨髓

4、細胞做原代培養(yǎng)。1.2免疫細胞化學方法鑒定CD45，CD90的表達情況。 2大鼠糖尿病模型的建立2.1一次性腹腔注射鏈佐霉素建立大鼠糖尿病模型。 2.2監(jiān)測大鼠血糖以確定建模是否成功。 2.3用免疫熒光方法(Insulin抗體)檢測胰腺冰凍切片。 3尾靜脈注射移植經過BrdU標記的MSC3.1用BrdU標記MSC。3.2尾靜脈注射移植MSC。 4移植后療效的檢測4.1監(jiān)測血糖和體重變化。

5、4.2取胰腺切片，免疫熒光方法檢測移植進受體的MSC能否在胰腺存活及其是否表達Insulin。 結果1分離培養(yǎng)鑒定了大鼠骨髓間充質干細胞，免疫組化CD45(-)、CD90(+)。.細胞的純化均一程度達到80％。 2建立了大鼠糖尿病模型，其血糖穩(wěn)定＞6.7mmol/L。 3經MSC移植的糖尿病大鼠血糖有所下降，但仍高于正常水平，體重上升。在接受MSC移植的大鼠胰腺內發(fā)現(xiàn)大量外源性MSC，大部分在胰腺內增殖旺盛，并有