副結(jié)核病DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效果評(píng)價(jià).pdf

1、副結(jié)核病是主要由禽分枝桿菌副結(jié)核亞種引起的一種慢性消耗性疾病，在許多國家尤其是發(fā)展中國家仍廣泛流行，該病給畜牧業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，控制副結(jié)核病的意義重大，然而，至今仍沒有一種疫苗可用于該病的預(yù)防。
　　本研究利用 PCR技術(shù)，以本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建好的重組質(zhì)粒 pET32a-0862-2154c和pET32a-2751-2762c為模板擴(kuò)增出map0862-2154c和map2751-2762c，連接到真核表達(dá)載體pCDNA3.

2、1(+)中，構(gòu)建了真核重組質(zhì)粒pCDNA-map0862-2154c（簡稱 pC0862-2154c）和pCDNA-map2751-2762c（簡稱pC2751-2762c），并原核表達(dá)純化了融合蛋白r0862-2154c和r2751-2762c。分別以融合DNA疫苗、重組亞單位疫苗、滅活苗、BCG及pCDNA3.1(+)免疫4月齡牛，共免疫3次，每次間隔2周，滅活苗和BCG僅免疫1次。于免疫后每周頸靜脈采血分離血清，分別以融合蛋白r0

3、862-2154c和r2751-2762c為包被抗原，間接ELISA方法檢測血清中抗體水平；每次免疫后2周，以融合蛋白r0862-2154c和r2751-2762c混合物為刺激源，MTT法檢測淋巴細(xì)胞增殖情況（刺激指數(shù)SI值）；每次免疫后2周，以ELISA試劑盒檢測細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-6分泌水平；并且在三免后第三周，以牛分枝桿菌純化蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）進(jìn)行

4、了皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)。
　　結(jié)果表明，重組亞單位疫苗組的血清抗體水平明顯高于其它各組，其中融合DNA疫苗組的血清抗體水平要高于滅活苗和BCG；融合DNA疫苗組的IFN-γ、SI值及IL-2分泌水平明顯高于其它各組，并且分泌水平很高；融合DNA疫苗組的IL-4及IL-6分泌水平也高于其它各組，但分泌水平較低。PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，融合DNA疫苗組、重組亞單位疫苗組及對(duì)照組的皮膚厚度差并無變化，而滅活苗和BCG免疫組呈現(xiàn)陽性變