不同血液凈化方式對尿素癥患者外周血單核細胞源性巨噬細胞膽固醇外流影響的研究.pdf

1、目的：隨著血液凈化技術(shù)的不斷發(fā)展，維持血液透析患者的生存率較以往有了顯著提高。然而，心血管疾病(Cardiovasculardisease，CVD)仍是維持透析患者(Maintenance hemodialysispatients，MHD)主要并發(fā)癥和主要死亡原因。有研究表明，高通量血液透析濾過(High-flux hemodiafiltration，HDF)有助于改善透析患者的脂質(zhì)代謝紊亂，減輕炎癥反應(yīng)，降低維持透析患者心血管疾病發(fā)生

2、率和死亡率。然而，HDF減輕脂代謝紊亂降低患者心血管事件發(fā)生的機制尚未完全清楚。ATP結(jié)合盒受體A1(ATP-binding cassettetransporter A1，ABCA1)、ATP結(jié)合盒受體G1(ATP-binding cassettetransporter G1，ABCG1)是膽固醇逆轉(zhuǎn)運中最重要的受體，在脂代謝紊亂及動脈硬化發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。因此，本課題以人外周血單核巨噬細胞為研究對象，觀察不同血液凈化方式對尿毒

3、癥患者外周血單核巨噬泡沫細胞形態(tài)以及巨噬細胞ABCA1、ABCG1mRNA及蛋白的表達情況的影響;觀察不同血液凈化方式尿毒癥患者外周血Treg/Th17比例變化及與ABCA1、ABCG1表達的關(guān)系。以探討不同血液透析方式對尿毒癥患者動脈粥樣硬化的影響及其可能的作用機制，為尿毒癥患者動脈粥樣硬化的臨床預(yù)防和治療尋找更合理治療的方法。
　　方法：選取重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院長期規(guī)律透析的慢性腎衰患者60例，按不同血液凈化方式分為2組:

4、血液透析(hemodialysis，HD)組、血液透析濾過(HDF)組，每組30例，同時選取健康體檢者20例。均于透析前抽取空腹靜脈血，密度梯度離心分離尿毒癥患者外周血單個核細胞，巨噬細胞集落刺激因子誘導(dǎo)貼壁巨噬化，油紅0染色、CD68免疫熒光鑒定巨噬細胞，酶法測定巨噬細胞內(nèi)總膽固醇(TotalCholesterol, TC)、膽固醇酯(Cholesterol Ester，CE)和游離膽固醇(FreeCholesterol，F(xiàn)C)的水平

5、;應(yīng)用RT-PCR與Western blot方法測定巨噬細胞ABCA1、ABCG1 mRNA及其蛋白表達。密度梯度離心法獲得外周血單個核細胞，流式細胞技術(shù)檢測不同血液凈化方式患者外周血Treg、 Th17細胞及Treg/Th17比例表達情況，ELISA法測定患者血清IL-6、TNF-α、IL-10水平，探討Treg/Th17比例失衡對巨噬細胞ABCA1、ABCG1的影響，闡明兩者的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.HD、HDF組巨噬細胞內(nèi)總膽

6、固醇、膽固醇脂均較對照組增加（P＜0.01）;與對照組比較，HD、HDF組巨噬細胞游離膽固醇明顯增加（P＜0.05）;HDF組較HD組巨噬細胞內(nèi)總膽固醇、膽固醇脂、游離膽固醇減少（P＜0.05）。
　　2.與對照組比較，HD、HDF組巨噬細胞ABCA1 mRNA、ABCG1 mRNA的表達均顯著降低（P＜0.01，P＜0.01），HDF組較HD組患者的ABCA1mRNA、ABCG1 mRNA表達明顯升高（P＜0.01，P＜0.05

7、）。
　　3.與對照組比較，HD組、HDF組巨噬細胞ABCA1、ABCG1蛋白表達均明顯下降（P＜0.01; P＜0.05），HDF組與HD組比較ABCA1、ABCG1蛋白表達均升高（P＜0.05）。
　　4.HD、HDF組患者外周血中Treg細胞的比例明顯低于對照組(P＜0.05)，HDF組明顯高于HD組(P＜0.05)。HD、HDF組患者外周血中Th17細胞的比例明顯高于對照組(P＜0.05)，HDF組明顯低于HD組(P

8、＜0.05)。HD、HDF組患者Treg/Th17的比值明顯低于對照組（P＜0.05），HDF組比HD組明顯升高（P＜0.05）。
　　5.與對照組比較，HD、HDF組外周血單個核細胞Foxp3 mRNA的表達顯著降低（P＜0.01，P＜0.01）;與HD組比較，HDF組患者的Foxp3 mRNA表達明顯升高（P＜0.05）。與對照組比較，HD、HDF組R0R-γ tmRNA的表達顯著升高(P＜0.01，P＜0.01)，與HD組比

9、較，HDF組R0R-γ t mRNA表達升高(P＜0.05)。
　　6.與對照組比較，HD、HDF組患者血清IL-6、TNF-α水平均增高(P＜0.05)，而IL-10水平減低(P＜0.05); HDF組患者血清IL-6、TNF-α水平均低于HD組（P＜0.05);HDF組患者血清IL-10水平高于HD組（P＜0.05）。
　　7.尿毒癥血液透析患者Treg細胞比例與ABCA1、ABCG1 mRNA呈正相關(guān)（r=0.793，

10、P＜0.05; r=0.698，P＜0.05）;而Th17細胞比例ABCA1、ABCG1mRNA呈負相關(guān)（r=-0.711，P＜0.05; r=-0.387，P＜0.05）;尿毒癥血液透析患者Treg細胞比例與ABCA1、ABCG1蛋白呈正相關(guān)(r=0.791，P＜0.05;r=0.761，P＜0.05);而Th17細胞比例ABCA1、ABCG1蛋白呈負相關(guān)(r=-0.577，P＜0.05; r=-0.685，P＜0.05)。