不同血液凈化方式對(duì)尿素癥患者外周血單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞膽固醇外流影響的研究.pdf

1、目的：隨著血液凈化技術(shù)的不斷發(fā)展，維持血液透析患者的生存率較以往有了顯著提高。然而，心血管疾病(Cardiovasculardisease，CVD)仍是維持透析患者(Maintenance hemodialysispatients，MHD)主要并發(fā)癥和主要死亡原因。有研究表明，高通量血液透析濾過(guò)(High-flux hemodiafiltration，HDF)有助于改善透析患者的脂質(zhì)代謝紊亂，減輕炎癥反應(yīng)，降低維持透析患者心血管疾病發(fā)生

2、率和死亡率。然而，HDF減輕脂代謝紊亂降低患者心血管事件發(fā)生的機(jī)制尚未完全清楚。ATP結(jié)合盒受體A1(ATP-binding cassettetransporter A1，ABCA1)、ATP結(jié)合盒受體G1(ATP-binding cassettetransporter G1，ABCG1)是膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)中最重要的受體，在脂代謝紊亂及動(dòng)脈硬化發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。因此，本課題以人外周血單核巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察不同血液凈化方式對(duì)尿毒

3、癥患者外周血單核巨噬泡沫細(xì)胞形態(tài)以及巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1mRNA及蛋白的表達(dá)情況的影響;觀察不同血液凈化方式尿毒癥患者外周血Treg/Th17比例變化及與ABCA1、ABCG1表達(dá)的關(guān)系。以探討不同血液透析方式對(duì)尿毒癥患者動(dòng)脈粥樣硬化的影響及其可能的作用機(jī)制，為尿毒癥患者動(dòng)脈粥樣硬化的臨床預(yù)防和治療尋找更合理治療的方法。
　　方法：選取重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院長(zhǎng)期規(guī)律透析的慢性腎衰患者60例，按不同血液凈化方式分為2組:

4、血液透析(hemodialysis，HD)組、血液透析濾過(guò)(HDF)組，每組30例，同時(shí)選取健康體檢者20例。均于透析前抽取空腹靜脈血，密度梯度離心分離尿毒癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)貼壁巨噬化，油紅0染色、CD68免疫熒光鑒定巨噬細(xì)胞，酶法測(cè)定巨噬細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TotalCholesterol, TC)、膽固醇酯(Cholesterol Ester，CE)和游離膽固醇(FreeCholesterol，F(xiàn)C)的水平

5、;應(yīng)用RT-PCR與Western blot方法測(cè)定巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1 mRNA及其蛋白表達(dá)。密度梯度離心法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)不同血液凈化方式患者外周血Treg、 Th17細(xì)胞及Treg/Th17比例表達(dá)情況，ELISA法測(cè)定患者血清IL-6、TNF-α、IL-10水平，探討Treg/Th17比例失衡對(duì)巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1的影響，闡明兩者的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.HD、HDF組巨噬細(xì)胞內(nèi)總膽

6、固醇、膽固醇脂均較對(duì)照組增加（P＜0.01）;與對(duì)照組比較，HD、HDF組巨噬細(xì)胞游離膽固醇明顯增加（P＜0.05）;HDF組較HD組巨噬細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、膽固醇脂、游離膽固醇減少（P＜0.05）。
　　2.與對(duì)照組比較，HD、HDF組巨噬細(xì)胞ABCA1 mRNA、ABCG1 mRNA的表達(dá)均顯著降低（P＜0.01，P＜0.01），HDF組較HD組患者的ABCA1mRNA、ABCG1 mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.01，P＜0.05

7、）。
　　3.與對(duì)照組比較，HD組、HDF組巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1蛋白表達(dá)均明顯下降（P＜0.01; P＜0.05），HDF組與HD組比較ABCA1、ABCG1蛋白表達(dá)均升高（P＜0.05）。
　　4.HD、HDF組患者外周血中Treg細(xì)胞的比例明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)，HDF組明顯高于HD組(P＜0.05)。HD、HDF組患者外周血中Th17細(xì)胞的比例明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，HDF組明顯低于HD組(P

8、＜0.05)。HD、HDF組患者Treg/Th17的比值明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），HDF組比HD組明顯升高（P＜0.05）。
　　5.與對(duì)照組比較，HD、HDF組外周血單個(gè)核細(xì)胞Foxp3 mRNA的表達(dá)顯著降低（P＜0.01，P＜0.01）;與HD組比較，HDF組患者的Foxp3 mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，HD、HDF組R0R-γ tmRNA的表達(dá)顯著升高(P＜0.01，P＜0.01)，與HD組比

9、較，HDF組R0R-γ t mRNA表達(dá)升高(P＜0.05)。
　　6.與對(duì)照組比較，HD、HDF組患者血清IL-6、TNF-α水平均增高(P＜0.05)，而IL-10水平減低(P＜0.05); HDF組患者血清IL-6、TNF-α水平均低于HD組（P＜0.05);HDF組患者血清IL-10水平高于HD組（P＜0.05）。
　　7.尿毒癥血液透析患者Treg細(xì)胞比例與ABCA1、ABCG1 mRNA呈正相關(guān)（r=0.793，

10、P＜0.05; r=0.698，P＜0.05）;而Th17細(xì)胞比例ABCA1、ABCG1mRNA呈負(fù)相關(guān)（r=-0.711，P＜0.05; r=-0.387，P＜0.05）;尿毒癥血液透析患者Treg細(xì)胞比例與ABCA1、ABCG1蛋白呈正相關(guān)(r=0.791，P＜0.05;r=0.761，P＜0.05);而Th17細(xì)胞比例ABCA1、ABCG1蛋白呈負(fù)相關(guān)(r=-0.577，P＜0.05; r=-0.685，P＜0.05)。