sPLA-,2--ⅡA對正常人單核誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞膽固醇外流的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化過程是大血管及中血管的一種慢性炎癥，大量研究表明，在心血管病患者血清中分泌型磷脂酶型A2的IIA亞型（sPLA2-IIA）水平會升高，而且升高的程度與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。許多研究證實(shí)sPLA2-IIA不僅僅是動脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因子和發(fā)生冠狀動脈事件的預(yù)測因子，而且在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起著一定的作用。目前關(guān)于sPLA2-IIA的抑制劑（Varespladib）已經(jīng)進(jìn)入Ⅱ期臨床研究，但是sPLA2-IIA在促進(jìn)動脈粥樣硬

2、化的發(fā)展進(jìn)程中機(jī)制尚未完全清楚。膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)是在動脈粥樣硬化的發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其初始環(huán)節(jié)為膽固醇外流。本研究旨在探討sPLA2-IIA對于膽固醇外流環(huán)節(jié)的影響。
　　 研究目的
　　 1.探討不同濃度sPLA2-IIA對正常人外周血單核巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1、SRB1的mRNA及蛋白的表達(dá)情況的影響。
　　 2.通過以HDL和ApoA1為接受體，研究不同濃度sPLA2-IIA干預(yù)后正常人單核巨噬細(xì)胞的膽

3、固醇外流功能。
　　 方法
　　 1.選取正常人外周血經(jīng)過Ficoll密度梯度離心法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），貼壁法進(jìn)行篩選，M-CSF刺激培養(yǎng)使單核細(xì)胞巨噬化。CD68免疫組化染色鑒定巨噬細(xì)胞。
　　 2.Real-Time PCR方法檢測不同濃度sPLA2-IIA對正常人單核巨噬細(xì)胞上干預(yù)24h后ABCA1、ABCG1、SRBI的mRNA表達(dá)的影響。
　　 3.Western Blot方法檢

4、測不同濃度sPLA2-IIA對正常人單核巨噬細(xì)胞干預(yù)24h的ABCA1、ABCG1、SRB1的蛋白表達(dá)。
　　 4.H3膽固醇標(biāo)記巨噬細(xì)胞，經(jīng)過不同濃度sPLA2-IIA干預(yù)24h后分別以HDL為接受體，觀察經(jīng)ABCG1通路的膽固醇外流；以apoA1為接受體，觀察經(jīng)ABCA1通路的膽固醇外流。
　　 5.統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以X±SD表示，組間比較以one-way ANOVA進(jìn)行分析。

5、
　　 結(jié)果：
　　 1.1）Real-Time PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著sPLA2-IIA濃度的增加，ABCA1mRNA表達(dá)呈下降趨勢；當(dāng)sPLA2-IIA為0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml刺激巨噬細(xì)胞后ABCA1mRNA較空白對照組下降（P<0.01），但3個(gè)濃度組間的ABCA1的表達(dá)無明顯差別；1μg/ml的sPLA2-IIA對ABCA1表達(dá)抑制最為明顯，相對于其他濃度組亦有明顯的抑制作用（P<

6、0.01）；2）sPLA2-IIA濃度為0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml時(shí)，對ABCG1mRNA呈抑制趨勢，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；隨著濃度增加，該差異逐漸明顯，當(dāng)sPLA2-IIA濃度為1μg/ml可明顯抑制ABCG1的表達(dá)（p=0.033）；3）sPLA2-IIA為0.5μg/ml及1μg/ml時(shí)對SRB1mRNA有著較明顯的抑制作用，P值分別為0.011和0.007。
　　 2.Western Blot檢

7、測結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過各濃度sPLA2-IIA干預(yù)24小時(shí)ABCA1、ABCG1、SRB1的蛋白表達(dá)在各組之間無顯著差異。
　　 3.經(jīng)過各濃度sPLA2-IIA干預(yù)24小時(shí)后由HDL和ApoA1介導(dǎo)的膽固醇外流率均有下降趨勢，但尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論
　　 1.經(jīng)過sPLA2-IIA不同濃度干預(yù)正常人單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞24小時(shí)，本研究的各干預(yù)濃度均對ABCA1的基因表達(dá)水平起抑制作用；sP