2-甲氧基雌二醇對全腦缺血大鼠模型HIF-1α及凋亡相關(guān)基因的作用.pdf

1、目的：探討HIF-1α(缺氧誘導(dǎo)因子-1α)在全腦缺血損傷急性期的作用；探討2-甲氧基雌二醇對全腦缺血大鼠模型海馬HIF-1α、HIF-1依賴的凋亡相關(guān)基因RTP801以及凋亡最終通路caspase-3表達(dá)的作用。 方法健康成年雄性SD大鼠90只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、全腦缺血未治療組(GI)和全腦缺血+2ME2治療組(GI+2ME2)3組，其中GI組和GI+2ME2組按再灌注時間不同又分為6h、12h、24h、48h

2、、72h、5d和7d7個亞組，假手術(shù)組和各亞組均6只大鼠。采用改良的Pulsineli 4血管閉塞法(4-vo)制作全腦缺血大鼠模型。應(yīng)用腦電圖檢測模型是否成功。GI組和GI+2ME2組大鼠全腦缺血時間為10分鐘。GI+2ME2組大鼠模型制備成功后立即給予2-甲氧基雌二醇(2ME2，16mg/Kg/day)腹腔注射。其中，6h、12h和24h亞組僅給予一次2ME2治療，48h亞組在第二天再次給予一次同樣劑量的2ME2，72h、5d和7d

3、亞組在第二天和第三天分別再次給予一次同樣劑量的2ME2。GI組相應(yīng)時間點(diǎn)各亞組給予等劑量生理鹽水腹腔注射。應(yīng)用Ni ssl染色進(jìn)行大鼠海馬神經(jīng)元計數(shù)，應(yīng)用免疫組織化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法分別檢測大鼠海馬HIF-1α蛋白、caspase-3蛋白和RTP80lmRNA表達(dá)。所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)的形式表示，數(shù)據(jù)用SPSSl3.0軟件包做統(tǒng)計分析，檢驗水準(zhǔn)α=O.05。 結(jié)果：全腦缺血損傷引起大鼠海馬C

4、Al區(qū)神經(jīng)元減少，隨著缺血后時間延長神經(jīng)元脫失增加，缺血后7天神經(jīng)元計數(shù)最少。GI組是24h、48h、72h、5d和7d亞組大鼠海馬CAl區(qū)神經(jīng)元計數(shù)與假手術(shù)組相比有顯著性差異(P<0.05)。在假手術(shù)組大鼠海馬CAl區(qū)中極少見HIF-1 a蛋白、caspase-3蛋白有陽性表達(dá)，而在GI組大鼠海馬CAl區(qū)于全腦缺血后6小時可見HIF-la蛋白、caspase-3蛋白表達(dá)增加，72小時表達(dá)至高峰，隨后下降。GI組中24h、48h、72

5、h、5d和7d亞組大鼠海馬CAl區(qū)二者陽性細(xì)胞計數(shù)與假手術(shù)組相比有顯著性差異(P<0.05)。假手術(shù)組大鼠海馬中未見RTP801mRNA表達(dá)，GI組大鼠海馬RTP80lmRNA于缺血后6小時可見表達(dá)增加，24d,時表達(dá)至高峰，然后隨著時間延長表達(dá)降低，5天仍可見其表達(dá)，7天表達(dá)降至正常水平。 GI+2ME2組與GI組相比，大鼠海馬CAl區(qū)神經(jīng)元計數(shù)明顯增加，但仍低于假手術(shù)組，GI+2ME2組中除6h、12h亞組外神經(jīng)元計數(shù)與假手

6、術(shù)組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。GI+2ME2組中神經(jīng)元計數(shù)隨時間變化趨勢同GI組。GI+2ME2組中48h、72h、5d和7d亞組大鼠海馬CAl區(qū)神經(jīng)元計數(shù)與GI組相應(yīng)時間點(diǎn)亞組相比有顯著性差異(P<0.05)。GI+2ME2組大鼠海馬CAl區(qū)HIF-1a蛋白、caspase-3蛋白表達(dá)明顯低于GI組，但仍高于假手術(shù)組，GI+2ME2組中除6h、12h亞組外二者陽性細(xì)胞計數(shù)與假手術(shù)組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。GI+2ME

7、2組中二者陽性細(xì)胞計數(shù)隨時間變化趨勢同GI組。GI+2ME2組中48h、72h、5d和7d亞組大鼠海馬CAl區(qū)二者陽性細(xì)胞計數(shù)與GI組相應(yīng)時間點(diǎn)亞組相比有顯著性差異(p<0.05)。GI+2ME2組大鼠海馬RTP801 mRNA表達(dá)與GI組相比明顯減低，其隨時間變化趨勢同GI組。GI+2ME2組中12h、24h、48h、72h和5d亞組RTP80ImRNA表達(dá)與GI組相應(yīng)時間點(diǎn)相比有顯著差異(p<0.05)。 結(jié)論：嚴(yán)重全腦缺血

8、急性期HIF-1 a(缺氧誘導(dǎo)因子一1 a)的過渡表達(dá)對大鼠海馬神經(jīng)元是有害的。HIF-1 a的過渡表達(dá)可誘導(dǎo)一系列HIF-1下游及相關(guān)凋亡基因表達(dá)，導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡，其可能是嚴(yán)重全腦缺血損傷引起神經(jīng)元凋亡的機(jī)制之一。嚴(yán)重全腦缺血損傷急性期應(yīng)用2-甲氧基雌二醇治療具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用，其可能機(jī)制之一是2-甲氧基雌二醇抑制了HIF-1 a的過度表達(dá)，從而抑制了HIF-1依賴的凋亡相關(guān)基因RTP801以及凋亡最終通路caspase-3的表達(dá)