山楂果肉原花青素的分離、鑒定與生物活性研究.pdf

1、山楂是一種在我國廣泛分布的薔薇科植物,是一種集食品營養(yǎng)價值及藥用價值為一身的保健水果,含有多種具有生理活性的化學(xué)成分,其中的原花青素具有很強(qiáng)的抗氧化性。原花青素(Proanthocyanidin,簡稱PC)是多酚類物質(zhì),具有高度羥基化的結(jié)構(gòu),能夠起到抗氧化、清除自由基、抑菌等作用,有很好的開發(fā)利用價值。
　　 (1)本研究首先測定山楂葉子與果肉中蛋白質(zhì)、總糖、總酸、總多酚、總黃酮和原花青素等主要化學(xué)成分的含量,并將不同品種山楂果

2、肉中原花青素的含量作一比較,結(jié)果表明山東平邑縣所產(chǎn)新品系“超金星”山楂果肉中原花青素的含量較高,很有研究意義,所以確定為實驗材料。
　　 (2)對HSPC的提取工藝進(jìn)行了初步探討,通過單因素實驗,在中心組合實驗基礎(chǔ)上,運用響應(yīng)面分析法得出了提取HSPC的最佳工藝組合:溫度80.66℃,時間90.17min,乙醇濃度68.11％,pH5,料液比1:12,提取2次。在此條件下HSPC的平均提取率可達(dá)95.9％。采用固相萃取的方法對山

3、楂果肉提取物中原花青素進(jìn)行了純化,產(chǎn)物純度為82.69％,原花青素的得率為3.36％；并采用乙酸乙酯萃取法和石油醚沉淀法進(jìn)一步對固相萃取后的HSPC粗提物(PC1)進(jìn)一步純化。結(jié)果表明,乙酸乙酯萃取和石油醚沉淀的分離效果明顯,并由此得到了四種不同類型的HSPC提取物,即乙酸乙酯萃取物、乙酸乙酯萃取水相提取物、石油醚沉淀物和石油醚沉淀水相提取物。乙酸乙酯萃取物(PC2)純度達(dá)75.31％,得率為1.98‰乙酸乙酯萃取水相提取物(PC3)純

4、度達(dá)81.22％,得率為1.63％；石油醚沉淀水相提取物(PC4)純度達(dá)82.19％,得率為2.98％；石油醚沉淀物(PC5)純度達(dá)62.13％,得率為0.42％。
　　 (3)通過對五種不同類型HSPC進(jìn)行的UV、IR光譜分析,通過UV光譜圖,可以確定HSPC的特征吸收峰在280nm處,與葡萄籽原花青素標(biāo)品的UV光譜吸收一致；通過IR光譜圖,證實了HSPC的基本骨架結(jié)構(gòu),與葡萄籽原花青素標(biāo)品結(jié)果基本一致。綜上所述,可以初步判斷

5、HSPC各提取物中的主要成分為不同聚合度的原花青素混合物。
　　 通過對五種不同類型HSPC進(jìn)行的HPLC色譜分析,參照標(biāo)品HPLC色譜圖,可以得出山楂果肉中含有山楂果肉中含有多種原花青素低聚體,且乙酸乙酯萃取對HSPC粗提物的分離效果要優(yōu)于石油醚沉淀,乙酸乙酯萃取相能夠集中大部分的原花青素低聚體。HPLC-MS進(jìn)一步證實了乙酸乙酯萃取相HSPC含有多種原花青素單體和低聚體,具有開發(fā)利用價值。通過對乙酸乙酯萃取物酸水解產(chǎn)物的高效

6、液相色譜分析,證明山楂果肉中原花青素聚合體末端單元由(-)-Epicatechin組成。
　　 (4)通過體外實驗研究了不同提取物的油脂抗氧化、清除自由基活性和抑菌活性。
　　 ①油脂抗氧化結(jié)果表明山楂果肉PC具有較強(qiáng)的抗氧化能力,0.04％原花青素的抗氧化活性與0.02％BHT的抗氧化效果相近,0.02％原花青素的抗氧化活性優(yōu)于0.02％茶多酚、0.02％Vc、0.02％檸檬酸和0.02％酒石酸,Vc、檸檬酸、酒石酸對

7、原花青素的抗氧化作用均有不同程度的協(xié)同效應(yīng)。
　　 ②化學(xué)發(fā)光法測定山楂果肉原花青素乙酸乙酯萃取物的體外抗氧化活性及其對DNA損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明,當(dāng)HSPC濃度為1mg/mL時,對超氧陰離子抑制率達(dá)87.7％,其半數(shù)抑制率濃度IC50值為130.8μg/mL;100μg/mL時對羥基自由基抑制率達(dá)91.7％,IC50值為61.72μg/mL；8μg/mL時對雙氧水抑制率達(dá)91.6％,IC50值為0.19μg/mL;40μg

8、/mL時對體外DNA損傷抑制率達(dá)80.7％,IC50值為22.16μg/mL。表明HSPC具有很好的體外清除活性氧和保護(hù)DNA損傷的活性。
　　 ③抑菌實驗結(jié)果表明:各產(chǎn)物對細(xì)菌都有不同程度的抑制作用,其中對金黃色葡萄球菌的抑制效果最好,而對霉菌和酵母菌幾乎無抑制作用。各級分之間相比,其中PC1、PC2和PC4對細(xì)菌的抑制效果較好,這可能與各產(chǎn)物的成分有關(guān)。溫度和pH值對抑菌活性有較大影響,低溫處理和微堿性條件有利于抑菌活性的發(fā)