大鼠胚胎卵巢移植的實驗研究.pdf

1、背景和目的：卵巢是女性重要的生殖和內(nèi)分泌器官，它的功能受損或喪失會對女性的身體和生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴重的影響。在臨床上許多情況會造成女性卵巢功能早衰(Prematureovarianfailure，POF)，如長期使用避孕藥、患有遺傳性疾病、卵巢疾病、惡性腫瘤放療或化療后、因疾病而切除卵巢等。目前針對POF的治療唯有傳統(tǒng)的激素替代療法(hormonereplacementtherapy，HRT)，由于外源性雌激素在體內(nèi)呈非生理性釋放，可產(chǎn)生一

2、些副反應(yīng)，致中風(fēng)、心臟病以及乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率增加。卵巢移植技術(shù)因能夠為POF患者提供新的生殖功能和內(nèi)分泌功能且避免了HRT可能帶來的危險而逐漸為人們所重視。 卵巢移植始于19世紀，大致可以分為異種移植、自體移植及同種異體移植。異種移植的優(yōu)勢在于能夠方便的獲取供體，但是其最大的問題是能引起強烈而迅速的超免疫排斥反應(yīng)，目前的研究較少。吻合血管的卵巢自體移植由于供體來源受限、缺血時間及再灌注損傷對卵巢遠期功能有影響，尚需進一

3、步解決。同種異體卵巢移植目前多數(shù)研究都是采用的成年及新生幼仔作為供體，但最大的問題也是免疫排斥反應(yīng)。20世紀90年代卵巢冷凍保存技術(shù)及移植免疫學(xué)的發(fā)展促進了同種異體移植的研究，但是免疫抑制劑價格的昂貴及其毒性和副作用又使其臨床應(yīng)用有限。如何找到一種新的方法來解決以上問題成為了學(xué)者們新的課題，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)胚胎細胞有較強的分化能力；能產(chǎn)生高水平的血管源性因子、神經(jīng)原因子，移植后易成活；胚胎器官組織相容性抗原呈低水平表達，降低了移植后的排斥反

4、應(yīng)等，胚胎組織作為移植供體非常理想，有望解決上述問題。因此有學(xué)者提出了胚胎卵巢移植的可行性，但是相關(guān)的研究較少，移植后卵巢的生物活性如何尚不明確。本研究將大鼠胚胎卵巢組織移植至成年去勢雌性大鼠腎被膜下，目的在于了解其異體移植后生長發(fā)育及內(nèi)分泌功能，為胚胎卵巢移植提供實驗依據(jù)。 方法：1.采用18-20周的SD大鼠，實驗分為假手術(shù)組(20只)，去勢組(20只)，移植組(30只)，分別于移植后40天及90天取材進行比較。同時為了比較

5、移植卵巢與正常卵巢生長發(fā)育有無差異，特選出正常發(fā)育的40日齡大鼠10只，90日齡大鼠10只，分別與移植后40天及90天的移植組進行比較，將成年雌性大鼠進行去勢，同時將孕18-20天的胎鼠卵巢組織移植到去勢大鼠腎被膜下，移植后每天取大鼠的陰道涂片檢查，依據(jù)涂片結(jié)果判斷大鼠的動情周期是否出現(xiàn)及出現(xiàn)時間。2.移植后40天及90天分別取移植部位的卵巢組織及子宮進行病理切片檢查，并取血測定雌二醇(E2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH)及黃體生成

6、素(LH)，了解移植后卵巢內(nèi)分泌功能的恢復(fù)情況及組織形態(tài)學(xué)的變化。3.正常發(fā)育的大鼠，用陰道涂片法測定動情周期，并于40及90日齡時取血測定激素及卵巢組織切片，與相應(yīng)天數(shù)的移植組兩者進行比較有無差異。4.移植組與去勢組及假手術(shù)組之間進行激素及病理切片的比較，了解有無差異。 結(jié)果：(1)假手術(shù)組20例和去勢組20例全部存活，移植組30例存活25例，再隨機成兩部分，40天取材組12例(其中失敗2例)，90天取材組13例(其中失敗2例

7、)，移植成功21例，成功率：70％。(2)陰道涂片觀測首次動情周期出現(xiàn)時間，正常發(fā)育組為56.1±5.23天，移植組為35.8±4.16，組間差異顯著(p＜0.01)。(3)子宮稱重：40天移植組與假手術(shù)組無明顯差異，明顯高于正常發(fā)育組(p＜0.01)；90天假手術(shù)組、移植組、正常發(fā)育組之間無明顯差異。病理切片比較顯示去勢組子宮呈現(xiàn)明顯萎縮，移植組子宮呈正常發(fā)育狀態(tài)。(4)術(shù)后40天、90天取移植組的移植部位卵巢組織病理切片，結(jié)果顯示移

8、植卵巢內(nèi)可見不同發(fā)育階段的卵泡、間質(zhì)腺和黃體，與假手術(shù)組無明顯差異，正常發(fā)育組40天時未見成熟卵泡。(5)移植手術(shù)后40天及90天，各組分別取血測定E2、P、FSH、LH，去勢組E2、P水平明顯低于移植組(p＜0.01)，F(xiàn)SH、LH水平明顯高于移植組(p＜0.01)，40天時移植組的E2、P水平高于正常發(fā)育組(p＜0.01)，90天時兩組差異不顯著；移植組術(shù)后40天與90天時各項比較差異不顯著。 結(jié)論：1、本組動物實驗證明，大