Her-2-neu膜外及跨膜區(qū)蛋白基因重組腺病毒的構建和誘導的免疫效應.pdf

1、第一軍醫(yī)大學博士學位論文Her2neu膜外及跨膜區(qū)蛋白基因重組腺病毒的構建和誘導的免疫效應姓名：馬樹東申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤內(nèi)科學指導教師：羅榮城20040516博士論史：Her21neu臆外及跨膜基蛋白基固熏紐艨縭毒的約建和謗導妁免疫效藏的重緞質粒到293甑裝細胞系中，篩選得到rAdHer2一ECDs，rAdHer2ECD鞠rAdHer2TM；大麓擴臻，氯純銫梯囊密發(fā)怒速離心縫健麓，采粥物理方法測定病毒濂度，證明分弱褥至《546

2、X10”VP／ml，29510’WP／ml，84010砼VP／ml的商滴度瘸毒。Hela細胞感染傳代三次來出現(xiàn)細胞瘸變。感染293細胞履，綴WesternBlot檢測誕明冀在細腿內(nèi)獲褥了表達，勞艇襲遮量隨著感染復數(shù)韻增加而升高。提示我們成功地獲褥了高純度和舞滴麓翡，栽霄效感染憊裝綴藏熬rAdHer2wECDs，rAdHer2一ECD鞠rAdHer2一TM。爨rAdHer2ECDs，rAdHer2ECD幫rAdHe垃一TM戳l10”VP暹

3、邋辮飼、腿肉注射、腹腔注射秘越靜脈注射途徑免疫Balb／c，j、鼠，戲察rAdHer2ECDs，rAdrier2一ECD和rAdHer2TM在小鼠體內(nèi)襲達后誘導兔疫應答情況。結果鼴示，不同病瓣同～途徑之間抗Her2抗體漓度無明懿麓異。在不商的途籟麗一病毒之瀾抗Her2抗體滴度顫耀靜脈注射綴為最褰，冀凌戈囂蓮囊注瓣組窩黢整注瓣縫，援者囂弱顯麓異(P0。05)，毽均明鼴高于胃飼組(P005)。在不同途徑中，以靜脈注射誘發(fā)的CTL漣性必最強，

4、筵逢睫淀蹇砉彝黢整注麓次之，霉鑭最毳(pO05)。瓷三個壤組腺瘸毒中，以tAdHer2，TM誘發(fā)的CTL活性為綴高。嗣1101‘vp的rAdHer2ECDS瓶肉注射，j、鼠，注莉艏2周外麗血中即出現(xiàn)Her2抗體，其后滴度逐漸升到離，第三周達到高峰，然尉緩慢有所下降。免疫廂第2髑誘發(fā)了小鬣出城特異髓豹CTL活程，予蒙3弼齊達到最高峰，著譙麓隸乎上維持較長蹲潤；以不弱瓣痿毒顆粒數(shù)瓣rAdHer2TM腿凌注瓣小鼠，只有在病毒爝達到110lov

5、p時才產(chǎn)生可測定的抗Her2抗體，隨羲瘸毒璧款秀裹，Her2捩體瀵發(fā)亦睫之囂焱。惶只在瘸繇量達到51010vp，較高效靶繃胞之比時，才能檢測劐CTL活性，隧藉感染的病毒數(shù)量豹升高，eTL活性有掰秀麓。提示，將rAdHer2ECDs，rAdHer2ECD和rAdHer2一TM作為載體疫苗，在小鼠體內(nèi)成功地誘齠了Her2／neu特異經(jīng)豹兔疫瘟答，其露鵜顯的盛翔價值，鑣褥避一步深入研究。英蓐，我們將rAdHer2，ECDs，rAdHer2一囂