Her-2-neu膜外及跨膜區(qū)蛋白基因重組腺病毒的構(gòu)建和誘導(dǎo)的免疫效應(yīng).pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文Her2neu膜外及跨膜區(qū)蛋白基因重組腺病毒的構(gòu)建和誘導(dǎo)的免疫效應(yīng)姓名：馬樹東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：羅榮城20040516博士論史：Her21neu臆外及跨膜基蛋白基固熏紐艨縭毒的約建和謗導(dǎo)妁免疫效藏的重緞質(zhì)粒到293甑裝細(xì)胞系中，篩選得到rAdHer2一ECDs，rAdHer2ECD鞠rAdHer2TM；大麓擴(kuò)臻，氯純銫梯囊密發(fā)怒速離心縫健麓，采粥物理方法測(cè)定病毒濂度，證明分弱褥至《546

2、X10”VP／ml，29510’WP／ml，84010砼VP／ml的商滴度瘸毒。Hela細(xì)胞感染傳代三次來(lái)出現(xiàn)細(xì)胞瘸變。感染293細(xì)胞履，綴WesternBlot檢測(cè)誕明冀在細(xì)腿內(nèi)獲褥了表達(dá)，勞艇襲遮量隨著感染復(fù)數(shù)韻增加而升高。提示我們成功地獲褥了高純度和舞滴麓翡，栽霄效感染憊裝綴藏熬rAdHer2wECDs，rAdHer2一ECD鞠rAdHer2一TM。爨rAdHer2ECDs，rAdHer2ECD幫rAdHe垃一TM戳l10”VP暹

3、邋辮飼、腿肉注射、腹腔注射秘越靜脈注射途徑免疫Balb／c，j、鼠，戲察rAdHer2ECDs，rAdrier2一ECD和rAdHer2TM在小鼠體內(nèi)襲達(dá)后誘導(dǎo)兔疫應(yīng)答情況。結(jié)果鼴示，不同病瓣同～途徑之間抗Her2抗體漓度無(wú)明懿麓異。在不商的途籟麗一病毒之瀾抗Her2抗體滴度顫耀靜脈注射綴為最褰，冀凌戈囂蓮囊注瓣組窩黢整注瓣縫，援者囂弱顯麓異(P0。05)，毽均明鼴高于胃飼組(P005)。在不同途徑中，以靜脈注射誘發(fā)的CTL漣性必最強(qiáng)，

4、筵逢睫淀蹇砉彝黢整注麓次之，霉鑭最毳(pO05)。瓷三個(gè)壤組腺瘸毒中，以tAdHer2，TM誘發(fā)的CTL活性為綴高。嗣1101‘vp的rAdHer2ECDS瓶肉注射，j、鼠，注莉艏2周外麗血中即出現(xiàn)Her2抗體，其后滴度逐漸升到離，第三周達(dá)到高峰，然尉緩慢有所下降。免疫廂第2髑誘發(fā)了小鬣出城特異髓豹CTL活程，予蒙3弼齊達(dá)到最高峰，著譙麓隸乎上維持較長(zhǎng)蹲潤(rùn)；以不弱瓣痿毒顆粒數(shù)瓣rAdHer2TM腿凌注瓣小鼠，只有在病毒爝達(dá)到110lov

5、p時(shí)才產(chǎn)生可測(cè)定的抗Her2抗體，隨羲瘸毒璧款秀裹，Her2捩體瀵發(fā)亦睫之囂焱?；讨辉谌臭砹窟_(dá)到51010vp，較高效靶繃胞之比時(shí)，才能檢測(cè)劐CTL活性，隧藉感染的病毒數(shù)量豹升高，eTL活性有掰秀麓。提示，將rAdHer2ECDs，rAdHer2ECD和rAdHer2一TM作為載體疫苗，在小鼠體內(nèi)成功地誘齠了Her2／neu特異經(jīng)豹兔疫瘟答，其露鵜顯的盛翔價(jià)值，鑣褥避一步深入研究。英蓐，我們將rAdHer2，ECDs，rAdHer2一囂