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1、目的:利用已構(gòu)建的大鼠肝再生增強因子(rALR)畢赤酵母(pichiapastoris)重組表達質(zhì)粒pPIC9K-rALR,在酵母菌GS115中誘導表達rALR,并進行純化和體外生物學活性鑒定,為進一步研究rALR的生物學功能提供基礎(chǔ);探討重組大鼠肝再生因子(rrALR)對轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)誘導的腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的影響。 方法:經(jīng)PCR鑒定的重組質(zhì)粒pPIC9K-rALR酶切線性化后轉(zhuǎn)入宿主菌GSl15中,在甲
2、醇誘導下進行表達。表達產(chǎn)物rALR經(jīng)超濾方法純化后,用15%SDS-PAGE和Western blot印跡鑒定。采用3H-TdR摻入法,觀察rALR在體外對人肝癌細胞株QGY的促增殖作用以鑒定其活性;觀察細胞形態(tài)學變化,檢測α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、E一鈣粘蛋白(E-cadherin)和結(jié)締組織生長因子(CTGF)蛋白及mRNA的表達水平。 結(jié)果:目的蛋白rALR以外分泌方式在宿主菌GSl15中獲得高效表達,其分子量約為1
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