Shh信號通路在MNNG轉(zhuǎn)化GES-1細(xì)胞系惡變中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：研究經(jīng)低濃度化學(xué)誘導(dǎo)劑MNNG轉(zhuǎn)化GES-1細(xì)胞系為惡性細(xì)胞MC，用以探討SonicHedgehog信號通路在胃癌細(xì)胞中的激活方式。
　　方法：復(fù)蘇凍存的GES-1細(xì)胞，待細(xì)胞生長至鋪滿瓶底時，細(xì)胞可以傳代或凍存留種；在生長旺盛的GES-1細(xì)胞中加入5ml不含有血清的培養(yǎng)液及10ul0.01mol/LMNNG，使MNNG終濃度為2×10-5mol/L（DMSO濃度0.2％），避光培養(yǎng)24小時，第二天更換不含MNNG的培養(yǎng)液，

2、繼續(xù)培養(yǎng)，此細(xì)胞記作MC，記錄細(xì)胞的形態(tài)變化；取對數(shù)生長的GES-1細(xì)胞及MC細(xì)胞，制備染色體及R顯帶與染色，觀察染色體的變化；應(yīng)用10mg/L的Shh抗體阻斷MC細(xì)胞中Shh信號通路，對照組應(yīng)用PBS，流式細(xì)胞儀檢測MC細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：細(xì)胞形態(tài)明顯發(fā)生變化，出現(xiàn)不規(guī)則形、長梭形、多觸角形及多核形細(xì)胞,10天左右MC細(xì)胞開始增殖，細(xì)胞間接觸緊密，呈多層生長、島樣單克隆生長，13天左右MC細(xì)胞可以傳代；GES-1細(xì)胞的染色