Notch信號通路在HBx致L02細胞惡性轉化中作用機制的初步研究.pdf

1、目的：本研究旨在研究乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）在致人體非腫瘤系肝細胞L02中的惡性轉化作用并初步探討Notch信號通路在此過程中的作用及機制。
　　 方法：通過載體將HBx全長基因轉入L02細胞構建穩(wěn)定表達HBx的細胞株L02/HBx，觀測轉染后細胞的增殖，細胞周期及凋亡的變化。再將其接種細胞于BALB/c裸鼠頸背部皮下，觀測其成瘤效應。進一步通過qRT-PCR和Western blotting檢測HBx對Notch信號通路重

2、要分子Jagged1，Notch1，Notch1-IC及Hes1表達水平的影響。并應用γ-分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號通路，通過檢測阻斷后Notch通路相關效應分子mRNA及蛋白表達水平的變化來判斷阻斷效率，并觀測阻斷后細胞的增殖，細胞周期及凋亡的變化。
　　 結果：
　　 （1）與對照組L02細胞相比，轉染HBx后的L02/HBx細胞增殖速度顯著加快，凋亡率及G0/G1期細胞比例明顯降低，S期細胞比例顯著增高

3、。
　　 （2）裸鼠成瘤實驗發(fā)現(xiàn)，轉染HBx后的L02/HBx細胞腫瘤增長速度及腫瘤重量顯著高于對照組。
　　 （3）qRT-PCR及Western blotting檢測表明，L02/HB x細胞的Notch1，Jagged1，Notch1-IC，Hes1在mRNA及蛋白表達水平上均顯著高于L02細胞。
　　 （4）應用γ-分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號通路后，L02/HBx細胞的存活率呈時間-劑量依賴性

4、降低，細胞周期呈時間-劑量依賴性抑制，凋亡呈時間-劑量依賴性增加，而阻斷Notch信號通路對正常的L02細胞生物學行為幾乎沒有影響。
　　 結論：我們的研究表明，（1）HBx可顯著促進人類非腫瘤肝細胞L02細胞株在體外和體內(nèi)的生長，即HBx可誘導L02細胞發(fā)生惡性轉化；（2）在這個過程中Notch信號通路的激活是不可缺少的:①在L02細胞中，HBx基因促進Notch信號通路主要分子Jagged-1,Notch-1,Notch1-

5、IC,Hes-1在mRNA及蛋白水平上的表達，即在L02細胞中，異位表達的HBx可激活Notch信號通路。結合第一部分的研究結果，初步表明Notch信號通路的激活與HBx刺激L02細胞的增殖并促進其轉化有關；②通過γ-secretase抑制劑DAPT阻斷L02/HBx細胞的Notch信號通路后，HBx所介導的L02細胞惡性轉化的生物學效應亦被阻斷，且呈劑量-時間依賴性；③而DAPT阻斷正常L02細胞的Notch信號通路對其生物學效應幾乎