內皮祖細胞對神經(jīng)干細胞增殖分化及Notch信號分子表達的影響.pdf

1、南昌大學醫(yī)學院碩士學位論文內皮祖細胞對神經(jīng)干細胞增殖分化及Notch信號分子表達的影響姓名：魯友明申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學（神經(jīng)外科）指導教師：鄧志鋒20080601摘要1貼壁篩選法分離培養(yǎng)大鼠EPCs，形態(tài)學、免疫細胞染色法檢測Vlll因子、FLK1、CDl33、CD34的表達及RT—PcR檢測eNOS、Vlll因子、FLK1、CDl33、Tie一2、CD34的基因表達鑒定EPCs。2神經(jīng)球懸浮法培養(yǎng)小鼠NSCs，免疫細胞染色法

2、檢測nestin的表達以鑒定NSCs。3建立transwell共培養(yǎng)體系，實驗共分為5組：(DEPCs與NSCs共培養(yǎng)組(EPcsNSCs)：實驗所用EFCs為原代，NSCs為第3代，共培養(yǎng)時，transwell上層皿為EPCs，下層皿為NSCs；(至)EPCs與經(jīng)SU5416處理后的NSCs共培養(yǎng)組[EPCs(SU5416NSCs)]：transwell下層皿的NSCs經(jīng)SU5416(10州)作用6h后再與上層皿的EPCs共培養(yǎng)；(蠶

3、)EPCs與經(jīng)DAPT處理后的NSCs共培養(yǎng)組[EPCs(DAPTNSCs)]：transwel1上層皿為EPCs，下層皿為已經(jīng)DAPT(10州)作用6h后的NSCs；④經(jīng)DAPT處理后的NSCs對照組(DAPTNSCs)：transwell上層皿為混合培養(yǎng)培養(yǎng)基，下層皿為已經(jīng)DAPT(10州)作用6h后的NSCs；⑤單純NSCs對照組(NSCs)：transwell上層皿為混合培養(yǎng)培養(yǎng)基，下層皿為NSCs。4采用RTPCR方法觀察各培

4、養(yǎng)組共培養(yǎng)2h、6h、12h后notch信號通路相關基因notchl、Hesl、mashl以及NSCs增殖分化相關基因ki67、神經(jīng)巢蛋白(nestin)、B一微管蛋白(BTubulin)、神經(jīng)膠質酸性蛋白(GFAP)的基因表達的變化。結果：1EFCs呈典型的“鵝卵石一排列生長，并經(jīng)細胞化學染色結果顯示Vlll因子、CD34、FL卜l和CDl33陽性，RT—PcR檢測有eNOS、Vlll因子、cD34、FLK—l、CDl33和Tie2的

5、基因表達，符合EPCs特征。2成球懸浮法培養(yǎng)的小鼠NSCs增殖旺盛，nestin呈陽性表達。3各共培養(yǎng)組NSCs增殖分化相關基因及notch信號通路相關基因的變化：(1)EPCs可促進NSCs的ki67及nestin基因表達。(EPcsNSCs)組與[EPCs(SU5416NSCs)]組比較，ki67及nestin基因表達明顯上調，說明EPCs可以促進NSCs的ki67、nestin基因表達且與EPCs分泌的內皮生長因子有關。(2)EP