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文檔簡介
1、目的:了解Notch信號在多發(fā)性骨髓瘤中的表達(dá)情況,探討調(diào)節(jié)該信號對腫瘤增殖、凋亡的影響及可能的機(jī)制,為骨髓瘤靶向治療的開展提供實驗依據(jù)。
方法:細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測Notch1及Hes1在骨髓瘤細(xì)胞株中的表達(dá);應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測Notch信號相關(guān)受體Notch1-3、配體Jag1、Jag2及特異性靶基因Hes1在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞U266及RPMI8226中的表達(dá),并與健康供者來源淋巴細(xì)胞表達(dá)情況進(jìn)行比較;以Jag
2、2、Hes1為指標(biāo),應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測PHI處理對骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞株Notch信號表達(dá)的影響;MTT檢測抑制Notch信號對瘤細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期改變,以DAPI法觀察瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,AnnexinV-FITC染色后流式檢測細(xì)胞凋亡情況。實時熒光定量PCR檢測抑制Notch信號后PTEN、mTOR在骨髓瘤中的表達(dá)改變。
結(jié)果:細(xì)胞免疫化學(xué)染色結(jié)果示Hes1在兩種骨髓瘤中均為陽性。實時熒
3、光定量PCR發(fā)現(xiàn)Notch信號在骨髓瘤細(xì)胞中的表達(dá)高于健康供者來源細(xì)胞,其中,Jag2、Hes1在兩種骨髓瘤中的表達(dá)量較健康供者來源淋巴細(xì)胞高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。PHI處理后,RPMI8226細(xì)胞株Jag2、Hes1表達(dá)量均出現(xiàn)劑量依賴性降低,差異具統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。抑制Notch信號后骨髓瘤細(xì)胞增殖受抑;S期細(xì)胞明顯減少,細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期;出現(xiàn)凋亡;細(xì)胞中PTEN表達(dá)量升高,mTOR表達(dá)量降低,與
4、對照組相比,差異具統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
結(jié)論:(1)Notch信號在多發(fā)性骨髓瘤U266、RPMI8226細(xì)胞中存在異常高表達(dá),這可能是配體異?;罨斐傻?;
(2)PHI可抑制Notch信號在多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞中的表達(dá);
(3)抑制Notch信號可使骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞增殖受抑、細(xì)胞周期停滯于G0/G1期,發(fā)生凋亡;
(4)通過抑制Notch信號抑制腫瘤
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