妊娠期糖尿病胎膜中水通道蛋白mRNA表達(dá)的研究.pdf

1、目的：水通道蛋白（aquaporins，AQPs）是一組與液體跨細(xì)胞膜流動(dòng)相關(guān)的蛋白家族，由一系列具有同源性的內(nèi)在膜蛋白組成。自1991年Arg等完成了對(duì)AQP1的克隆和鑒定，迄今為止，已經(jīng)從哺乳動(dòng)物組織中鑒定出了13種水通道蛋白，即AQPO、AQP1～12，稱為水通道蛋白家族。他們廣泛的存在于動(dòng)物、植物、微生物機(jī)體組織細(xì)胞中，尤其與液體分泌和吸收有關(guān)的上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞含量豐富，參與水的分泌、吸收及細(xì)胞內(nèi)外水的平衡，屬古老的跨膜通道蛋

2、白家族。妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指妊娠期間首次出現(xiàn)或發(fā)現(xiàn)的糖尿病。其發(fā)病率世界各國(guó)報(bào)道差異很大，我國(guó)為3～6％。大多數(shù)患者產(chǎn)后糖代謝異常能恢復(fù)正常，但將來(lái)患糖尿病的機(jī)會(huì)增加。妊娠期糖尿病的臨床經(jīng)過(guò)復(fù)雜，對(duì)母兒均有較大危害，須引起重視。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)、外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，AQP1、3、9在胎盤(pán)、絨毛膜及羊膜中均有表達(dá)，且提出他們都是介導(dǎo)大量水分子順滲透壓梯度跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的重要通道，雖然

3、AQPs在各種代謝性疾病中引起水平衡紊亂已有大量研究，但其在糖代謝異常孕婦胎膜中的表達(dá)及其與糖代謝異常時(shí)出現(xiàn)的羊水平衡紊亂的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)與免疫發(fā)光法研究AOP1、3、9基因在妊娠期糖尿病患者胎膜中的表達(dá)、監(jiān)測(cè)糖代謝異常孕婦空腹血糖及空腹血胰島素水平，比較兩者間的相關(guān)性，探求水通道蛋白在妊娠期糖尿病影響胎膜變化及羊水量異常的可能機(jī)制，對(duì)尋找和預(yù)防由糖代謝異常引起的羊水量變化導(dǎo)致的高危

4、妊娠有重要意義。水通道蛋白期望成為一種新的診斷指標(biāo)和靶向藥物。
　　 方法：1.研究對(duì)象選擇我院產(chǎn)科病房足月妊娠（37-40周）發(fā)生妊娠期糖尿病者7例設(shè)A組；正常足月妊娠者7例作為對(duì)照設(shè)B組。兩組受試對(duì)象為單胎孕婦，其孕周與年齡差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照6版《婦產(chǎn)科學(xué)》。排除標(biāo)準(zhǔn)：兩組孕婦均排除慢性高血壓、妊娠期高血壓疾病、心臟病、肝腎疾病及其它免疫系統(tǒng)疾??；排除新生兒畸形及羊水量異常。
　　 2.標(biāo)本采集受試對(duì)象在

5、分娩前抽取清晨空腹靜脈血，測(cè)量身高、體重；在分娩或剖宮產(chǎn)術(shù)胎盤(pán)娩出后立即于無(wú)菌條件下去除其表面血跡及羊水，留取胎膜兩塊，大小約1.0*1.0c㎡，用磷酸緩沖液（PBS）徹底沖洗3次后，立即將組織置入液氮速凍后，貯藏于-80℃超低溫冰箱保存待測(cè)。
　　 3.實(shí)驗(yàn)方法采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)半定量技術(shù)檢測(cè)胎膜中水通道蛋白1、3、9mRNA的表達(dá)。采用免疫發(fā)光法測(cè)定靜脈血空腹胰島素及空腹血糖的水平。
　　 4.采用SPSS13.

6、0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為正態(tài)分布，所有數(shù)據(jù)方差齊，采用2樣本t檢驗(yàn)。P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：1.實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均有水通道蛋白1、3、9的mRNA表達(dá)。
　　 2.AQP3、9兩種亞型在兩組中表達(dá)水平有顯著性差異（P<0.05），AQP1在兩組中未發(fā)現(xiàn)有顯著性差異（P>0.05）。
　　 3.兩組中空腹靜脈血胰島素的水平無(wú)顯著差異（P>0.05）。兩組中空腹血糖有明顯差異，兩組中空腹血糖與胎

7、兒體重呈明顯正相關(guān)，由于樣本例數(shù)的原因，其與空腹胰島素、體重指數(shù)未發(fā)現(xiàn)有明顯相關(guān)性。
　　 結(jié)論：1.水通道蛋白1、3、9mRNA在人妊娠足月胎膜中有表達(dá).
　　 2.水通道蛋白3、9mRNA在妊娠期糖尿病組的孕婦胎膜上的表達(dá)水平明顯高于正常組孕婦胎膜的表達(dá)水平，而水通道蛋白1在兩組中的表達(dá)無(wú)明顯差異。
　　 3.胎膜中水通道蛋白的分子結(jié)構(gòu)、表達(dá)的強(qiáng)弱以及在細(xì)胞中的分布位置共同參與羊水的動(dòng)態(tài)平衡.