立體定向血腫抽吸術(shù)對(duì)大鼠腦出血細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、目的：腦出血是神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)病，致死、致殘率很高，探討腦出血后腦組織損傷機(jī)制是目前臨床和實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究都表明細(xì)胞凋亡機(jī)制參與了出血后腦損傷，細(xì)胞凋亡與腦出血病程及預(yù)后密切相關(guān)。進(jìn)一步研究腦出血后細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制和如何早期減少細(xì)胞凋亡以促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)對(duì)指導(dǎo)臨床治療有重要意義。因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在大鼠腦出血模型上進(jìn)行血腫抽吸，觀察出血側(cè)尾狀核區(qū)細(xì)胞凋亡、凋亡執(zhí)行者-Caspases-3以及凋亡傳導(dǎo)信號(hào)Cyt c

2、、Fas的時(shí)程變化，并與未經(jīng)治療的腦出血組比較，探討早期血腫抽吸術(shù)對(duì)細(xì)胞凋亡途徑的干預(yù)作用及其機(jī)制。 方法：取健康雄性SD大鼠39只隨機(jī)分為4組，第1組為正常組，第2組為假手術(shù)組，第3組為腦出血(ICH組)，第4組為血腫抽吸組。ICH組又分為6h、12h、24h、3d、7d、11d六個(gè)時(shí)間點(diǎn)，抽吸組又分為12h、24h、3d、7d、11d五個(gè)時(shí)間點(diǎn)。將0.4units的Ⅳ型細(xì)菌膠原酶立體定向注入大鼠右側(cè)尾狀核建立腦出血模型。未做

3、任何處理的大鼠作為正常組；生理鹽水代替膠原酶注入大鼠尾狀核后6小時(shí)處死的作為假手術(shù)組；只注入膠原酶不進(jìn)行抽吸的為ICH組；在膠原酶注入大鼠尾狀核后6小時(shí)進(jìn)行立體定向血腫抽吸的作為血腫抽吸組。在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)用過(guò)量4﹪水合氯醛麻醉動(dòng)物，迅速開胸暴露心臟，4﹪多聚甲醛200ml快速灌注，斷頭取腦，按常規(guī)程序制成厚度5um的石蠟切片，并制成組織芯片，用凋亡原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)和免疫組化方法檢測(cè)凋亡細(xì)胞、Caspase-3、Cyt c和

4、Fas的表達(dá)。 結(jié)果： 1.正常組大鼠大腦皮質(zhì)可見(jiàn)少量TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞，假手術(shù)組在針道周圍有散在TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。腦出血組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞在腦出血后6h明顯增多，與假手術(shù)組比較有顯著性(P<0.05)，12h繼續(xù)增加，24h～3d時(shí)達(dá)高峰，然后逐漸減少，11d時(shí)仍有較多陽(yáng)性細(xì)胞。血腫抽吸組12h，24h，3dTUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較ICH組明顯減少(P<0.05)。 2.正常組和假手術(shù)組兩側(cè)大腦半球只見(jiàn)零星C

5、aspase-3染色陽(yáng)性的細(xì)胞，腦出血組6h在血腫區(qū)及血腫周邊Caspase-3表達(dá)開始增加，與假手術(shù)比較差異有顯著性(P<0.05)，表達(dá)在3d時(shí)達(dá)高峰，7d開始回落，至11d時(shí)Caspase-3回落到6h水平。腦出血后11d內(nèi)Caspase-3表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)(r=0.711，P<0.01)。血腫抽吸組3d，11dCaspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較ICH組明顯減少(P<0.05)。 3．正常對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)Cyt c陽(yáng)性神

6、經(jīng)元，假手術(shù)組見(jiàn)到極少量陽(yáng)性細(xì)胞，腦出血組在腦出血后6h血腫周圍發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞，與假手術(shù)比較差異有顯著性(P<0.05)，12h后血腫周圍的陽(yáng)性細(xì)胞明顯增加，3d達(dá)高峰，11d明顯下降。腦出血后11d內(nèi)Cytc表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)(r=0.808，P<0.01)。血腫抽吸組12h，24h，7d，11dCyt c陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較ICH組明顯減少(P<0.05)。 4．假手術(shù)組及正常組對(duì)照組基底節(jié)區(qū)均未檢測(cè)到Fas蛋白表達(dá)。腦出血組

7、在腦出血后6h基底節(jié)區(qū)Fas表達(dá)丌始增加，3d達(dá)高峰，此后逐漸減少，11d仍見(jiàn)少量表達(dá)。腦出血后11d內(nèi)Fas表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)(r=0.867，P<0.01)。血腫抽吸組12h，7dFas陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較ICH組明顯減少(P<0.05)。 結(jié)論： 1．腦出血后血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞損傷有凋亡機(jī)制參與，細(xì)胞凋亡重要調(diào)控因子Caspase-3的表達(dá)與腦出血后細(xì)胞凋亡的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。 2．腦出血后血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞凋