鴨瘟病毒gH、TK、UL24基因的克隆與病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、根據(jù)已發(fā)表的鴨瘟病毒(DEV) gH，TK，UL24基因序列，設(shè)計(jì)合成了1對(duì)引物，PCR法對(duì)DEV疫苗株的gH-TK-UL24基因進(jìn)行了全段擴(kuò)增，產(chǎn)物克隆至pMD-18T載體并測(cè)序。結(jié)果顯示：插入片段全長(zhǎng)5021bp，包括三個(gè)ORF，分別編碼gH，TK，UL24基因。與GenBank中已登錄的DEV同源基因進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)gH，TK，UL24基因核苷酸序列同源性分別在99.8﹪-100﹪，99.5﹪1-00﹪，99.8﹪-100﹪之間；推

2、導(dǎo)的氨基酸序列同源性分別在99.6﹪-100﹪，99.5﹪-100﹪，99.8﹪1-00﹪之間。與24株α皰疹病毒參考株系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，鴨瘟病毒與馬立克氏病病毒親緣關(guān)系最近，但在三種基因進(jìn)化樹中均形成獨(dú)立的一個(gè)分支。建議在α皰疹病毒亞科建立新的病毒屬——類鴨瘟病毒屬。 將鴨瘟病毒TK-UL24 DNA片段克隆于puc18載體中，構(gòu)建了pTK質(zhì)粒；將PCR擴(kuò)增的GFP真核表達(dá)盒插圖入pTK質(zhì)粒的TK基因內(nèi)部，獲得轉(zhuǎn)移載體質(zhì)

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