丹參酮對LPS誘導(dǎo)NF-κB活性增加的拮抗作用及其機理初探.pdf

1、該實驗從臨床經(jīng)驗方DXR中選取丹參作為研究對象,并借鑒炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的進展,推測丹參酮可以拮抗LPS加強NF-κB活性的作用,從而可以抑制炎癥細胞在動脈管壁集聚,抑制動脈粥樣硬化斑塊形成.旨在了解Tan對LPS增強NF-κB表達活性,并導(dǎo)致炎性細胞因子大量釋放的作用,從信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的角度闡明Tan拮抗LPS致炎作用的可能機制;為DXR拮抗LPS,防治動脈粥樣硬化的臨床應(yīng)用提供理論和實驗依據(jù);并為中醫(yī)藥復(fù)方研究提供新的思路,為中藥在分子水平

2、上的作用尋找新的藥物靶標.二、方法采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的細胞基因共轉(zhuǎn)染技術(shù)將含NF-κB的質(zhì)粒pNF-κB-TA-Luc和β-半乳糖苷酶表達質(zhì)粒pCMV-β共轉(zhuǎn)染人胚胎腎細胞HEK-293細胞,用細菌脂多糖(LPS)、丹參酮(Tan)刺激轉(zhuǎn)染后的HEK-293細胞,檢測并比較熒光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以確定LPS和Tan對NF-κB活性的影響;以基因重組技術(shù)構(gòu)建含全長TLR4重組腺病毒Ad-TLR4和含細胞內(nèi)段缺失的TLR4重組腺病毒Ad

3、-△TLR4;采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的細胞基因共轉(zhuǎn)染技術(shù)將含NF-κB的質(zhì)粒pNF-κB-TA-Luc和β-半乳糖苷酶表達質(zhì)粒pCMV-β共轉(zhuǎn)染CHO-K1細胞,并加用重組腺病毒感染,給以細菌脂多糖(LPS)、丹參酮(Tan)刺激,檢測并比較熒光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以確定LPS-TLR4通路在NF-κB激活中的作用;利用改進后的T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)對TLR4相互作用蛋白進行初步的篩選.四、結(jié)論1、正確構(gòu)建了含TLR4全長和細胞外段的重組

4、腺病毒,并在CHO-K<,1>細胞得到良好的表達.2、利用報告基因技術(shù)顯示了LPS對細胞內(nèi)NF-κB活性的增強作用,并發(fā)現(xiàn)Tan對這一增強作用有明顯的抑制效應(yīng).3、利用重組腺病毒技術(shù)驗證了LPS對NF-κB的活性增強作用主要是通過TLR4受體通路實現(xiàn)的,并發(fā)現(xiàn)了Tan對LPS的調(diào)節(jié)作用也是通過這一通路實現(xiàn)的.4、從分子水平闡明了Tan抑制LPS效應(yīng)的作用機制,為DXR防治動脈粥樣硬化的臨床應(yīng)用提供了理論和實驗依據(jù)5、為中醫(yī)藥復(fù)方研究提供