蛭龍活血通瘀膠囊對血管性癡呆大鼠的保護(hù).pdf

1、目的：研究蛭龍活血通瘀膠囊(ZHTC)對血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)及對凋亡的抑制作用,并初步探討其機(jī)制。
　　 方法:雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎法制備血管性癡呆大鼠模型；Morris水迷宮檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能；化學(xué)比色法測定血清及大腦皮層組織MDA含量、SOD及GSH-Px的活性；HE染色、光鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)改變；原位末端標(biāo)記法(TUNEL法)檢測海馬CA1神經(jīng)元的凋亡情況；免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測大鼠海

2、馬Bax、Bcl-2及Caspase-3的表達(dá)；RT-PCR檢測海馬組織中Caspase-3 mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:(1)學(xué)習(xí)記憶檢測結(jié)果:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠逃避潛伏期明顯增長(P<0.05),平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯縮短,跨越虛擬平臺(tái)的頻率明顯減低(P<0.05)；與模型組比較,陽性組和ZHTC高劑量組大鼠的逃避潛伏期明顯縮短,平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯增長,跨越虛擬平臺(tái)的頻率明顯增加(P<0.05)；(2)血清及大腦皮層

3、MDA含量、SOD及GSH-Px活性檢測結(jié)果:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠MDA含量明顯升高,SOD及GSH-Px活性降低(P<0.05)；與模型組比較,陽性組和ZHTC高劑量組大鼠MDA含量降低明顯,SOD及GSH-Px活性明顯升高(P<0.05)。(3)HE染色,光鏡觀察,假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)椎體細(xì)胞3～4層,排列緊密、整齊；細(xì)胞形態(tài)正常,胞體完整,界限清晰,很少或無變性脫失；胞核大而圓,胞質(zhì)豐富；模型組大鼠海馬CA1區(qū)椎體細(xì)胞丟

4、失明顯,細(xì)胞1～2層,排列紊亂、松散；椎體細(xì)胞界限不清,可見大量變形細(xì)胞；核固縮,核碎裂,深藍(lán)色；胞漿濃縮,及神經(jīng)細(xì)胞被吞噬；陽性組和ZHTC高劑量組大鼠的上述癥狀得到了明顯改善。(4)TUNEL結(jié)果:光鏡下,海馬CA1區(qū)凋亡神經(jīng)元特點(diǎn)為胞核棕黃色深染,形態(tài)不整,大小不一或伴有核周染色質(zhì)濃縮及凋亡小體存在；平均光密度(MOD):與假手術(shù)組比較,模型組大鼠MOD值明顯升高,(P<0.05)；與模型組比較,陽性組和ZHTC高劑量組MOD值明

5、顯降低(P<0.05)；(5)免疫組化結(jié)果:光鏡下,Caspase-3陽性表達(dá)呈棕黃色顆粒,在海馬神經(jīng)元胞核中,胞漿也有少量表達(dá)；Bax陽性表達(dá)棕黃色顆粒,位于海馬組織細(xì)胞胞漿中。Caspase-3及Bax在假手術(shù)組少量表達(dá),在模型組大量表達(dá)；與模型組比較,ZHTC高劑量組、陽性組表達(dá)減少明顯,中、低劑量組陽性表達(dá)減少不明顯。Bcl-2陽性表達(dá)呈棕黃色顆粒,位于海馬組織中,其在假手術(shù)組表達(dá)較多,在模型組表達(dá)較少；與模型組比較,ZHTC高

6、劑量組及陽性組表達(dá)顯著增多,中、低陽性表達(dá)增多不明顯。MOD:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠Bax及Caspase-3蛋白陽性表達(dá)的MOD值升高明顯(P<0.05),Bcl-2蛋白陽性表達(dá)的MOD值明顯降低(P<0.05)；與模型組比較,ZHTC高劑量組及陽性組給藥組Bax及caspase-3陽性蛋白表達(dá)MOD值明顯降低(P<0.05),Bcl-2蛋白陽性表達(dá)MOD值明顯增高(P<0.05)。(6)RT-PCR結(jié)果:瓊脂凝膠電泳圖片顯示,各

7、組大鼠都有目的基因條帶產(chǎn)生,模型組目的條帶亮度較假手術(shù)組明顯增加,而各給藥組的目的基因條帶模糊,亮度變暗；相對灰度值:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠相對灰度值明顯增加(P<0.05)；與模型組比較,陽性組和ZHTC高劑量組大鼠相對灰度值明顯降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論：(1)雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎法成功制備血管性癡呆大鼠模型。(2)蛭龍活血通瘀膠囊對血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元的損傷及凋亡具有較好抑制作用(3)其機(jī)制有:①通過增強(qiáng)S