冠心病患者凝血栓蛋白—1單核苷酸多態(tài)性.pdf

1、凝血栓蛋白-1(Thrombospondin-1，TSP-1)又稱(chēng)血小板反應(yīng)素－1，為一種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，大量存在于血小板顆粒和細(xì)胞外基質(zhì)中?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞包括激活的血小板、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞等都可以合成并分泌TSP－1。其與一系列因子相互作用，調(diào)控血小板粘附和聚集、血管平滑肌細(xì)胞增殖等細(xì)胞功能。Topol等于2001年在英國(guó)進(jìn)行的GeneQuest研究，入選了352例冠心病(Coronary Artery Dise

2、ase，CAD)患者，其中急性心肌梗死(Acute Myoc-ardial Infarction，AMI)190例和418例對(duì)照者，發(fā)現(xiàn)凝血栓蛋白-1基因第13外顯子編碼鈣結(jié)合域的單核苷酸多態(tài)性(Single Ncleotide Polymorphisms，SNP)即A8831G，使其編碼的第700位氨基酸即絲氨酸被天冬氨酸替代(N700S)，則早發(fā)AMI的危險(xiǎn)性是正常人的9倍，可以用來(lái)預(yù)測(cè)AMI發(fā)生。隨后意大利學(xué)者的研究重復(fù)了以上研究

3、結(jié)果，但荷蘭、日本等相關(guān)研究均未證實(shí)以上結(jié)果．因此，我們以2005年3月至2007年3月我院住院行冠狀動(dòng)脈造影患者為研究對(duì)象，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)行TSP-1單核苷酸多態(tài)性研究，探討其與冠心病的相關(guān)性。 對(duì)象和方法： 1.研究對(duì)象 所有入選對(duì)象均來(lái)自2005年3月至2007年3月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科的住院行冠狀動(dòng)脈造影患者。同時(shí)符合以下納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)。(1)冠心病組，符合WHO關(guān)于冠心病的診

4、斷標(biāo)準(zhǔn)：共178例，所有患者經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查，以冠狀動(dòng)脈主要分支中任何一支血管狹窄程度≥50％為陽(yáng)性；其中急性心肌梗死者55例，病例均符合2002年AHA／ACC關(guān)于AMI診斷指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)。 (2)對(duì)照組：共158例，經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查冠狀動(dòng)脈主要分支未發(fā)現(xiàn)明顯病變。排除標(biāo)準(zhǔn)：先天性心臟病、心肌病、心臟瓣膜病；腎臟和肝臟疾病患者；數(shù)月前有手術(shù)和外傷者；惡性腫瘤及發(fā)熱性疾病等。所有入選對(duì)象均為中國(guó)浙江地區(qū)漢族人，且無(wú)血緣關(guān)系，詳細(xì)調(diào)查

5、吸煙史，同時(shí)檢測(cè)血壓、血脂和空腹血糖等指標(biāo)． 2.材料和方法取外周靜脈血2ml，以常規(guī)酚／氯仿法提取基因組DNA；根據(jù)設(shè)計(jì)引物，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增TSP-1基因片段；取PCR產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖電泳凝膠電泳，溴化乙錠染色，凝膠成像分析系統(tǒng)觀察擴(kuò)增結(jié)果，結(jié)合DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)判斷是否為目的片斷；取PCR產(chǎn)物予BseNI內(nèi)切酶酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖電泳凝膠電泳，用凝膠成像分析系統(tǒng)觀察酶切結(jié)果。 結(jié)果： 1.

6、CAD組和對(duì)照組一般資料的比較兩組年齡、性別、高血壓患者比例比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)．CAD組吸煙發(fā)生率明顯高于對(duì)照組，兩者比較差異有顯著性(P<0.01)。兩組間甘油三酯(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL—C)等血脂比較差異無(wú)顯著性，但CAD組患者的高密度脂蛋白膽固醇(HDL—C)明顯低于對(duì)照組(P<0.01)。兩組間空腹血糖值比較差異無(wú)顯著性，但糖尿病患者比例明顯高于對(duì)照組(P<0.01)．兩組間收縮壓比較差異有顯著性，但

7、舒張壓比較差異無(wú)顯著性。 2.凝血栓蛋白-1基因第13外顯子不同基因型電泳圖譜從野生型不被BseNI內(nèi)切酶酶切，電泳結(jié)果為360 bp的單一條帶：AG雜合型被酶切成360、250、110 bp三條帶，GG突變型酶切后應(yīng)為250、110 bp兩條帶。 3.對(duì)照組和CAD組TSP-1基因多態(tài)性分布特點(diǎn)在所有被檢測(cè)的336例對(duì)象中，兩組均以從型為主，僅檢測(cè)出AG雜合型4例，未檢測(cè)到一例GG純合子。兩組中AG雜合型所占比例比較差

8、異無(wú)顯著性，AG型CAD發(fā)病無(wú)相關(guān)性(GA對(duì)AA：OR=2.691；95％可信區(qū)間為0.277～26.140 X2＝0.788P=0.375)。同時(shí)兩組G堿基所占比率比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)。G等位基因本研究對(duì)象中的表現(xiàn)率僅為0.6％。 結(jié)論： 1.兩組間甘油三酯(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL—C)等血脂比較差異無(wú)顯著性，可能和CAD患者已積極進(jìn)行調(diào)脂治療有關(guān)；兩組間空腹血糖值比較差異無(wú)顯著性，但糖尿病患者