白三烯B4通過(guò)MAPK信號(hào)上調(diào)HPA軸糖皮質(zhì)激素受體和CRH的表達(dá).pdf

1、研究背景和研究目的:盡管炎癥因子在病理過(guò)程中的作用得到了認(rèn)識(shí),但是炎癥因子在生理性功能和應(yīng)激狀態(tài)下的作用卻了解甚少。支氣管哮喘是一種炎癥性疾病。很多輕度哮喘患者在不經(jīng)治療的情況下可以很快中止發(fā)作或自愈。這種現(xiàn)象有待于解釋。我們前期研究表明致敏大鼠抗原攻擊后腦和肺組織中的細(xì)胞因子和白三烯B4(Leukotriene B4,LTB4)同步升高。腦室內(nèi)注射LTB4可抑制哮喘肺功能下降和肺組織炎性浸潤(rùn)變化,這些作用與LTB4刺激下丘腦促腎上腺皮

2、質(zhì)激素釋放激素(cortieotrophin-releasinghormone,CRH)mRNA和蛋白表達(dá),增加血漿內(nèi)促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)和腎上腺皮質(zhì)激素(corticosterone,CORT)水平有關(guān),上述作用可被LTB4的拮抗劑所阻斷,提示LTB4在哮喘發(fā)作過(guò)程中可能起負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。為此,我們進(jìn)一步研究了哮喘模型大鼠LTB4下丘腦定位注射對(duì)下丘腦、垂體、腎上腺和肺組

3、織糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid receptor,GR)和CRH mRNA和蛋白表達(dá)的影響,并通過(guò)LTB4刺激PC12細(xì)胞株表達(dá)GR和CRH mRNA和蛋白,研究其信號(hào)通路。
　　 方法:采用卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏SD大鼠,反復(fù)攻擊復(fù)制大鼠哮喘模型,在抗原攻擊前通過(guò)下丘腦定位注射的方法對(duì)清醒的致敏大鼠注射LTB4、LTB4受體1拮抗劑(BLT1)U75302及LTB4受體2拮抗劑(BLT2)L

4、Y255283,末次抗原攻擊半小時(shí)后取下丘腦、垂體、腎上腺和肺提取RNA和蛋白。
　　 分別取正常大鼠和哮喘模型大鼠的下丘腦,腺垂體組織進(jìn)行體外培養(yǎng),以LTB4刺激下丘腦、腺垂體組織塊,加LTB4受體拮抗劑進(jìn)行預(yù)處理。采用RT-PCR,Real-timePCR和westem blot的方法測(cè)定各組織中GR和CRH mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 采用大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞株作為研究的模型,用LTB4刺激PC12細(xì)胞

5、表達(dá)GR和CRH mRNA和蛋白,以多種信號(hào)途徑的抑制劑如Erk1/2、JNK、NF-KB抑制劑等預(yù)處理,研究LTB4誘導(dǎo)的GR和CRH表達(dá)時(shí)的MAPK、PI3K-AKT和JAK-STAT信號(hào)通路。
　　 結(jié)果:(1)在體外組織塊培養(yǎng)的試驗(yàn)中,正常大鼠和哮喘模型大鼠下丘腦、垂體和腎上腺組織塊經(jīng)LTB4刺激后,GR和CRH的mRNA表達(dá)顯著增加,用BLT1受體拮抗劑U7530210-7mol/L進(jìn)行預(yù)處理后,能顯著的抑制LTB4誘

6、導(dǎo)的GR和CRHmRNA表達(dá)的上升。而用BLT2受體拮抗劑LY25528310-7mol/L進(jìn)行預(yù)處理后只能部分拮抗LTB4誘導(dǎo)的GR和CRHmRNA表達(dá)的上升。
　　 (2)在整體下丘腦定位注射試驗(yàn)中,致敏大鼠單獨(dú)進(jìn)行OVA攻擊均能顯著增加HPA軸(hypothalamus-pimitary-adrenal axis,HPA axis)下丘腦、垂體和腎上腺GR和CRH的表達(dá)。下丘腦定位注射LTB4能進(jìn)一步增加OVA攻擊誘導(dǎo)的G

7、R和CRHmRNA的表達(dá)。U75302100ng進(jìn)行預(yù)處理后,能顯著的抑制LTB4誘導(dǎo)的GR和CRH mRNA表達(dá)的上升。而BLT2抑制劑LY255283100ng進(jìn)行預(yù)處理后只能部分抑制LTB4誘導(dǎo)的GR和CRH mRNA和蛋白表達(dá)的上升。不同的是,各處理組肺組織GRmRNA的表達(dá)無(wú)顯著差異。
　　 (3)LTB4呈劑量依賴性的上調(diào)PC12細(xì)胞GR和CRH的表達(dá)。用U7530210-7mol/L進(jìn)行預(yù)處理后,能顯著的抑制LTB

8、4誘導(dǎo)的GR和CRH mRNA和蛋白表達(dá)的上調(diào),而用LY25528310-7mol/L進(jìn)行預(yù)處理后只能部分抑制LTB4誘導(dǎo)的GR和CRHmRNA和蛋白表達(dá)的上升。
　　 (4)MAPK信號(hào)通路的抑制劑(Erk1/2抑制劑U012610μM或JNK抑制劑SP60012510μM)預(yù)處理,明顯抑制LTB4誘導(dǎo)PC12細(xì)胞表達(dá)GR和CRH mRNA。NF-KB抑制劑PDTC(10μM)預(yù)處理能顯著抑制LTB4誘導(dǎo)的CRH mRNA表達(dá)

9、的上升,但不抑制GR mRNA表達(dá)。P38抑制劑SB202190(10μM)預(yù)處理能顯著抑制LTB4誘導(dǎo)的GR蛋白表達(dá)的上調(diào),但PDTC、U0126、SP60012510μM對(duì)LTB4誘導(dǎo)的GR蛋白表達(dá)上調(diào)的抑制不明顯。此外,LTB4刺激PC12細(xì)胞激活MAPK通路中Erk1/2、JNK和p38磷酸化,但不能激活PI3K-AKT和JAK-STAT通路。
　　 結(jié)論:上述結(jié)果提示:LTB4與BLT1受體結(jié)合,可能通過(guò)激活MAPK通