miRNA-133a對(duì)心肌缺血再灌注損傷后心室重構(gòu)的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:缺血性心臟病經(jīng)介入及手術(shù)治療后，心外膜冠狀動(dòng)脈的再通并不意味著完全心肌再灌注的實(shí)現(xiàn)及正常機(jī)體內(nèi)環(huán)境的恢復(fù)，缺血再灌注后仍然存在著嚴(yán)重的心肌損害—心室重構(gòu)(LVRM)。因此，尋求有效的治療措施改善再灌注后心室重構(gòu)對(duì)治療缺血性心臟病具有重要意義。心肌缺血后心臟細(xì)胞內(nèi)某些基因表達(dá)紊亂，以致相應(yīng)調(diào)節(jié)的蛋白表達(dá)發(fā)生改變，可能是再灌注后心臟發(fā)生重塑的病理基礎(chǔ)。因此從基因水平研究心室重塑有可能為臨床上治療心室重塑提供新的思路。MicroRNAs

2、(miRNAs)是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的高度保守的非編碼小RNA，多種miRNAs被證實(shí)可減少缺血再灌注后心肌損傷。miRNA-133a在心肌增殖、分化及細(xì)胞凋亡機(jī)制中具有重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-133a可以減少壓力負(fù)荷后心室重塑，改善心臟功能。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)觀(guān)察心肌缺血再灌注損傷后心室重塑的動(dòng)態(tài)過(guò)程，研究miRNA-133a在此過(guò)程中的表達(dá)，探討miRNA-133a在抗心室重塑過(guò)程中的心肌保護(hù)作用。

3、深入研究miRNA-133a心肌保護(hù)機(jī)制，觀(guān)察其對(duì)再灌注后心室重塑的影響，可能為治療心肌再灌注損傷提供新的治療策略。
　　 方法:234只健康wistar大鼠隨機(jī)分為5組:1、假手術(shù)組（Sham組）:開(kāi)胸后將6/0無(wú)損傷縫線(xiàn)穿過(guò)左冠狀動(dòng)脈前降支，并不結(jié)扎阻斷血管;2、缺血再灌注損傷組（I/R組）:開(kāi)胸后使用6/0無(wú)損傷縫線(xiàn)結(jié)扎阻斷左冠狀動(dòng)脈60min后，開(kāi)放血管;3、agomiRNA-133a+I/R處理組（agomiRNA-1

4、33a+I/R組）:于阻斷血管前24h心肌內(nèi)注射agomiRNA-133a(分5點(diǎn)注射，每點(diǎn)2μg，共10μg)，其余處理同缺血再灌注損傷組;4、生理鹽水+I/R組（NS+I/R組）:于阻斷血管前24h心肌內(nèi)注射生理鹽水（分5點(diǎn)注射，每點(diǎn)10μl），其余處理同缺血再灌注損傷組;5、陰性序列+I/R組（Scramble+I/R組）:于阻斷血管前24h心肌內(nèi)注射陰性對(duì)照序列(分5點(diǎn)注射，每點(diǎn)2μg，共10μg)，其余處理同缺血再灌注損傷組。

5、選取術(shù)后1、3、7、15、30d5個(gè)時(shí)間觀(guān)察點(diǎn)，又將每組分為5個(gè)亞組。在術(shù)后各觀(guān)察點(diǎn)，分別使用經(jīng)胸超聲心動(dòng)和動(dòng)物生理記錄儀監(jiān)測(cè)心臟功能。后取心肌標(biāo)本，使用熒光實(shí)時(shí)定量Real-Time PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)心肌組織內(nèi)miRNA-133a的表達(dá)，Western-bloting法檢測(cè)心肌內(nèi)Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)，HE染色觀(guān)察組織形態(tài)學(xué)變化，天狼猩紅苦味酸染色法檢測(cè)缺血區(qū)間質(zhì)纖維化程度以及TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)。
　　

6、 結(jié)果:各個(gè)觀(guān)察時(shí)間點(diǎn)，I/R組與Sham組相比:I/R組大鼠的LVEF、LVFS、LVSP、±dp/dtmax均低于Sham組(p＜0.05)，LVEDP均高于Sham組(p＜0.05），且隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，I/R組，LVEF、LVFS、LVSP、±dp/dtmax均逐漸降低，LVEDP逐漸增高;心肌內(nèi)Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)均明顯上調(diào)(p＜0.05);早期心肌細(xì)胞凋亡率明顯升高(p＜0.05)，其中第3d，細(xì)胞凋亡率最高（54.6％±7

7、.3％）;缺血區(qū)間質(zhì)纖維化逐漸加重，其中第3d，纖維化開(kāi)始明顯[I/R VS Sham:（5.60±2.30）％VS（1.64±0.41）％，p＜0.05];心肌組織內(nèi)miRNA-133a表達(dá)下調(diào)(p＜0.05)，3d心肌組織內(nèi)miRNA-133a表達(dá)量最低（0.540±0.134）。上調(diào)miRNA-133a表達(dá)后，在相應(yīng)的觀(guān)察點(diǎn)與I/R組相比:LVEF、LVFS、LVSP、±dp/dtmax均明顯增高，LVEDP均明顯降低;心肌內(nèi)Ⅰ型