SSTR2逆轉(zhuǎn)EMT影響胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的：探討SSTR2基因?qū)σ认侔┣忠u轉(zhuǎn)移及EMT特性的影響。
　　方法：構(gòu)建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,分別轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc-1,用免疫熒光檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,RealTimePCR檢測轉(zhuǎn)染后Panc-1細(xì)胞SSTR2的基因水平的表達(dá),WesternBlot檢測轉(zhuǎn)染后Panc-1細(xì)胞SSTR2的蛋白水平的表達(dá)。采用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測未轉(zhuǎn)

2、染病毒的胰腺癌細(xì)胞(空白對照組)、轉(zhuǎn)染3FLAG-puromycin-LV的胰腺癌細(xì)胞(陰性對照組)和轉(zhuǎn)染SSTR2-LV的胰腺癌細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組)侵襲轉(zhuǎn)移能力的強(qiáng)弱。鏡下觀察轉(zhuǎn)染前后胰腺癌細(xì)胞Panc-1形態(tài)的變化,并用免疫熒光檢測轉(zhuǎn)染前后胰腺癌細(xì)胞Panc-1上皮表型蛋白E-cadherin和間質(zhì)表型蛋白vimentin定位表達(dá)差異,WesternBlot檢測轉(zhuǎn)染前后Panc-1細(xì)胞上皮表型蛋白E-cadherin,β-catenin和

3、間質(zhì)表型蛋白N-cadherin,Vimentin定量表達(dá)差異。
　　結(jié)果：SSTR2-LV可以有效轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株panc-1并穩(wěn)定表達(dá)SSTR2的mRNA和蛋白,建立了穩(wěn)定表達(dá)SSTR2的細(xì)胞模型。轉(zhuǎn)染SSTR2-LV的胰腺癌細(xì)胞Panc-1較空白對照組和陰性對照組侵襲遷移能力明顯受到抑制(P<0.01),而空白對照組和陰性對照組之間無明顯差異(P>0.05)。鏡下觀察胰腺癌細(xì)胞Panc-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染SSTR2-LV后,由成纖維

4、細(xì)胞樣、排列分散,雜亂轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞排列緊密如鋪路石般,且有極性。免疫熒光可見Panc-1轉(zhuǎn)染SSTR2-LV后細(xì)胞膜表達(dá)的E-cadherin熒光由胞漿轉(zhuǎn)移至細(xì)胞周邊濃聚,而Vimentin的熒光強(qiáng)度較前下降。用WesternBlot進(jìn)行蛋白定量分析,轉(zhuǎn)染SSTR2-LV后胰腺癌細(xì)胞Panc-1上皮表型標(biāo)志性蛋白E-cadherin,β-catenin表達(dá)量增高,間質(zhì)表型標(biāo)志性蛋白N-cadherin,Vimentin表達(dá)量減少,較空白對