HDL及其亞型氧化修飾對ECV304細胞組織因子表達的影響及相關(guān)機制.pdf

1、目的:探討HDL及其亞型被氧化修飾后對人臍靜脈內(nèi)皮細胞株ECV304細胞表達組織因子(tissue factor,TF)的影響以及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導機制。
　　方法: ECV304細胞分別經(jīng)不同濃度(10、20、40、80、100、120mg/L)、不同時間(2、3、4、5、6、7、8h)oxHDL、HDL及其亞型以及凝血酶(1、2、4、6、8、10IU,5h)孵育,采用實時定量PCR和Western Blot方法檢測TF表達情況。分別

2、用p38 MAPK、ERK1/2及JNK特異性抑制劑SB203580(0.1μmol/L)、PD98059(1μmol/L)、SP600125(0.1μmol/L)和PI3K特異性抑制劑wortmannin(0.1μmol/L)探討oxHDL及其亞型影響ECV304細胞TF表達的機制。
　　結(jié)果:
　　1.正常ECV304細胞中未檢測到TF表達,凝血酶呈濃度依賴性誘導其TFmRNA表達。
　　2.oxHDL及其亞型呈濃

3、度和時間依賴性誘導ECV304細胞TF mRNA表達,效應強度依次為oxHDL3﹥oxHDL﹥oxHDL2;oxHDL和oxHDL3還可顯著誘導TF蛋白表達。
　　3.HDL及其亞型呈濃度依賴性誘導ECV304細胞TFmRNA表達,但未顯著刺激其TF蛋白表達。
　　4.與天然HDL及其亞型相比,HDL及其亞型氧化修飾后TF表達不一,其中oxHDL3、oxHDL誘導ECV304細胞TFmRNA表達分別高于天然HDL3組,HDL

4、組。HDL2氧化修飾后與天然HDL2相比,不僅不使TFmRNA表達增加,反而下降。
　　5.p38MAPK、ERK1/2、JNK特異性抑制劑SB203580、PD98059、SP600125能不同程度抑制oxHDL(20mg/L)誘導的TF mRNA表達,與ECV304共孵育2h后,分別使oxHDL誘導的TFmRNA表達下降81％、95%和87%(P<0.05)。
　　6.抑制ERK1/2、p38MAPK和JNK信號轉(zhuǎn)導通路

5、后下調(diào)oxHDL2(100mg/L)誘導的TFmRNA水平,其中ERK1/2信號轉(zhuǎn)導途徑的抑制使TFmRNA水平較oxHDL2單獨處理組下降93%(P<0.05),JNK、p38MAPK抑制后分別使TFmRNA水平下降41%和64%(P<0.05)。
　　7.SP600125和SB203580使oxHDL3(80mg/L)誘導的ECV304細胞TFmRNA表達,分別增加了31%、34%(P<0.05);PD98059使oxHDL3

6、誘導的TFmRNA水平下調(diào)24%(P<0.05)。
　　8.細胞分別經(jīng)oxHDL、oxHDL2、oxHDL3和PI3K抑制劑wortmannin共育后, TFmRNA水平分別增高155%、93%和96%(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1. oxHDL及其亞型均呈濃度和時間依賴性誘導ECV304細胞TFmRNA表達,并以oxHDL3的效應最顯著;且oxHDL3、oxHDL但非oxHDL2顯著刺激ECV304細胞TF蛋