昆明鼠腹腔感染弓形蟲速殖子病理學及MIC3在速殖子上分布的研究.pdf

1、為了研究昆明鼠腹腔感染弓形蟲速殖子病理變化及微線體蛋白3（MIC3）在速殖子上的分布，對25只45~55日齡的雌性昆明鼠進行腹腔注射，每只小鼠1×105個國際標準株RH TypeI型弓形蟲速殖子，通過臨床癥狀觀察，將感染弓形蟲的昆明鼠斷頸處死，無菌收集腹液，顯微鏡下觀察速殖子的活力，并用血球計數板對所收集腹液中的速殖子進行計數，分別于4℃、-20℃、-80℃保存蟲株，觀察弓形蟲速殖子在特定環(huán)境下可存活時間的長短；腹液涂片作間接免疫熒光染

2、色（Indirect immunofluorescent assay，IFA），觀察MIC3在弓形蟲速殖子上的分布；取心、肝、脾、肺、腎、腦固定，常規(guī)石蠟切片，然后通過HE染色結合免疫組化染色（IHC）觀察各組織器官的病理變化及弓形蟲在各組織器官的分布。試驗結果如下：
　　1、臨床診斷：昆明鼠腹腔注射弓形蟲速殖子24h，昆明鼠精神略微下降，活動減少，采食、飲水正常；48h，其精神狀況不佳，采食、飲水量下降；72h，其精神沉郁、喜臥

3、，刺激挪動位置，采食、飲水量明顯下降或無采食，被毛逆立，弓背，腹部膨大，出現該臨床癥狀后，常規(guī)收集腹腔液，作懸滴片，顯微鏡下觀察，可見大量有活力的弓形蟲速殖子及巨噬細胞、淋巴細胞、肥大細胞等細胞成分。
　　2、弓形蟲保種試驗結果：在4℃冷藏保種15d后，弓形蟲速殖子仍可感染小鼠；在-20℃低溫凍存30d后，在顯微鏡下，仍可以觀察到活的速殖子，接種小鼠，致其發(fā)?。辉?80℃超低溫凍存50d后，對小鼠攻蟲，確定其發(fā)病后，可在腹腔液中觀

4、察到大量速殖子。
　　3、小鼠剖檢病變：感染組小鼠腹壁血管充血，肝臟、脾臟腫大，肝臟可見米粒大、白色壞死灶；腸壁血管充血。
　　4、病理組織學變化：
　　HE染色結果：昆明鼠感染弓形蟲后，在20只感染組小鼠中，18只小鼠的肝臟和脾臟發(fā)現弓形蟲納蟲泡及假包囊。在肝臟，肝索排列紊亂，部分肝細胞發(fā)生水泡變性、壞死；脾臟中細胞壞死，淋巴細胞減少，且納蟲泡及假包囊主要集中在紅髓區(qū)域；肺臟充血、出血，肺泡壁毛細血管擴張充血；心臟間

5、質增寬，充血，動脈血管擴張，腎小管上皮細胞腫脹、壞死，腎小管間毛細血管充血；腦組織血管充血，少量神經細胞壞死。
　　免疫組化染色結果：通過免疫組化染色，可將弓形蟲抗原所在的位置染成棕黃色，可觀察到感染組小鼠心、肝、脾、肺、腎、腦染色結果均呈陽性，結果說明弓形蟲抗原在各組織均有分布，感染弓形蟲后，其隨著血液循環(huán)及淋巴循環(huán)進入各組織，致使小鼠發(fā)病。
　　5、免疫熒光染色結果：利用免疫熒光染色，在倒置熒光顯微鏡下可見弓形蟲速殖子及