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文檔簡介
1、目的:用本實驗室配制含自體骨髓間充質干細胞(MSCs)的羊膜載體復合膜(羊膜-明膠-殼聚糖膜)植入皮膚全層缺損處.同時向該植入微環(huán)境內添加緩釋的bFGF和vitC等有利于修復的因素,從而在整個真皮修復過程中加深對表皮新生和重建速度的影響,探討真皮修復過程中對表皮的修復和重建是否有影響以及是否有促進表皮修復速度的最佳階段。 實驗材料與方法:抽取24只新西蘭大耳白兔的骨髓間充質干細胞,經(jīng)體外分離、培養(yǎng)、擴增、傳代并純化骨髓間充質干細
2、胞。將分離、純化出的第二代骨髓間充質干細胞以一定的密度接種于羊膜載體復合膜上,制成組織工程皮膚替代物。在每只兔的背側即脊柱兩側做三個創(chuàng)面,去除表真皮以及皮下組織,深度直達深筋膜,面積約為3.14cm<'2>,隨機分為A組B組和C組。將各組織工程皮膚替代物分別移植到三組創(chuàng)面上。A組創(chuàng)面即試驗組:為骨髓間充質干細胞+牛羊膜-明膠-殼聚糖復合膜+bFGF和vitC。B組創(chuàng)面:為骨髓間充質干細胞+牛羊膜.明膠.殼聚糖復合膜.C組創(chuàng)面:僅單純?yōu)榕?/p>
3、羊膜.明膠.殼聚糖復合膜。分別在植入術后7天、14天、21天這三個時間點取材觀察結果。用圖像分析儀法測算出各組各時間點的創(chuàng)面平均愈合面積(cm2)并計算出愈合率、采用大體觀察、常規(guī)組織學觀察(HE染色、Masson染色、Van Giesonr染色)、I型膠原免疫組織化學觀察、電鏡觀察、墨汁灌注法等化學染色動態(tài)觀察創(chuàng)面愈合情況。 實驗結果: ①A組在7天、14天、21天各時間點的新生真皮明顯較B組相應時間點的厚、活躍的I型
4、膠原陽性細胞數(shù)多、電鏡下粗面內質網(wǎng)擴張的成纖維細胞、血管和膠原纖維均較B組的多.在同等條件下比較在7天、14天、21天各時間點B組比c組的修復效果好。②A組術后14天和21天新生真皮表面,從其周邊正常有毛的皮膚中,表皮再生長入并覆蓋真皮修復創(chuàng)面的速度均比B組的快,在同等條件下比較B組的表皮覆蓋速度又比C組的快。尤其是在術后21天A組新生真皮全被新生表皮覆蓋,而且表皮幾乎均變?yōu)閺蛯?,但是B組不但表皮覆蓋的面積少于A組而且覆蓋真皮修復創(chuàng)面的
5、表皮細胞層次均少于A組。③應用圖像分析儀技術測得真皮修復創(chuàng)面的真皮厚度、表皮厚度、血管數(shù)量、成纖維細胞數(shù)量、愈合的創(chuàng)面面積并計算出創(chuàng)面愈合率。對這些數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理,通過方差分析得出,在真皮厚度、表皮厚度、血管數(shù)量、成纖維細胞數(shù)量、創(chuàng)面愈合率的比較中,A組B組和C組這三組有差異,A組比B組好,B組比C組好,差異有統(tǒng)計學意義。 結論: 體外培養(yǎng)的組織工程皮膚替代物植入全層皮膚缺損后,并向該缺損微環(huán)境內添加MSC和緩釋的b
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