豬小腸粘膜下層復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠肌腱缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)豬小腸粘膜下層(Small Intestine Submucous，SIS)復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)修復(fù)鼠跟腱缺損的實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探索SIS和BM-SCs在肌腱修復(fù)中的作用，為肌腱缺損修復(fù)提供新的依據(jù)。 方法：取Wistar鼠BMSCs行分離、純化、傳代培養(yǎng)，將第五代BMSCs一部分用于形態(tài)學(xué)、生物特性的檢測(cè)以及BrdU標(biāo)記。另一部分與理化處理后的SIS復(fù)

2、合。選54只健康Wistar鼠(200～300g)隨機(jī)分為A、B、C組，每組18只。將每只鼠的左側(cè)跟腱的內(nèi)側(cè)束切除0.8 cm，造成肌腱缺損模型，用改良的Kessler縫合法縫接。A組：用SIS復(fù)合BMSCs橋接缺損；B組：用單純SIS橋接缺損；C組：自體跟腱切除再回植。移植前3天、移植后3天、1周、2周進(jìn)行移植免疫學(xué)的檢測(cè)；移植后3、6、9周對(duì)標(biāo)本進(jìn)行大體形態(tài)、組織學(xué)觀察及圖像分析、生物力學(xué)測(cè)試。 結(jié)果：1.采用梯度密度離心法

3、分離結(jié)合貼壁篩選法可獲得較高純度和活性的BM-SCs，并能大量增殖；2.終濃度為10μmol/L和孵育48hBrdU標(biāo)記率>80％，且可以連續(xù)檢測(cè)到，提示BrdU標(biāo)記可用于BMSCs移植人體內(nèi)后存活、生長(zhǎng)和分化的動(dòng)態(tài)觀察；3。54只鼠均進(jìn)入結(jié)果分析。①移植后2周內(nèi)A、B兩組與C組白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明豬小腸粘膜下層作為異種移植材料沒(méi)有明顯免疫排斥；②經(jīng)免疫組化和天狼星紅染色圖像分析結(jié)果可知：術(shù)后3組均表

4、現(xiàn)為成纖維細(xì)胞的移人并逐漸增多，細(xì)胞形態(tài)經(jīng)歷了從修復(fù)早期到修復(fù)中晚及晚期改變，分泌膠原組織逐漸增多，SIS和自體跟腱均經(jīng)歷了逐漸降解，且同時(shí)被新生膠原組織替代的過(guò)程。A、B兩組I型膠原含量逐漸增多，III型膠原含量逐漸減少；A組在移植術(shù)后9周時(shí)I型膠原含量明顯高于B組(P<0.05)、III型膠原含量要少于B組(P<0.05)；A組在術(shù)后9周時(shí)I型及III型膠原含量與C組接近。結(jié)果表明，SIS復(fù)合BMSCs組修復(fù)替代結(jié)果明顯優(yōu)于單純SI

5、S組，與自體肌腱移植組接近。在術(shù)后9周時(shí)SIS復(fù)合BMSCs組肉眼下豬小腸粘膜下層形態(tài)與正常肌腱已基本相同，光鏡下豬小腸粘膜下層已被新生的肌腱所完全替代，成纖維細(xì)胞沿長(zhǎng)軸方向有序排列且出現(xiàn)大量的膠原細(xì)胞外間質(zhì)；③在生物力學(xué)測(cè)試中，3組均表現(xiàn)為抗負(fù)荷強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)的過(guò)程，在移植后9周時(shí)A組生物力學(xué)強(qiáng)度(52.17±2。43N)要明顯優(yōu)于B組(46.75±2.89N)，P<0.05，基本接近C組(55.78±2.14N)，P<0.05；④電鏡