豬小腸粘膜下層復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細胞修復(fù)大鼠肌腱缺損的實驗研究.pdf

1、目的：通過豬小腸粘膜下層(Small Intestine Submucous，SIS)復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)修復(fù)鼠跟腱缺損的實驗，進一步探索SIS和BM-SCs在肌腱修復(fù)中的作用，為肌腱缺損修復(fù)提供新的依據(jù)。 方法：取Wistar鼠BMSCs行分離、純化、傳代培養(yǎng)，將第五代BMSCs一部分用于形態(tài)學(xué)、生物特性的檢測以及BrdU標(biāo)記。另一部分與理化處理后的SIS復(fù)

2、合。選54只健康Wistar鼠(200～300g)隨機分為A、B、C組，每組18只。將每只鼠的左側(cè)跟腱的內(nèi)側(cè)束切除0.8 cm，造成肌腱缺損模型，用改良的Kessler縫合法縫接。A組：用SIS復(fù)合BMSCs橋接缺損；B組：用單純SIS橋接缺損；C組：自體跟腱切除再回植。移植前3天、移植后3天、1周、2周進行移植免疫學(xué)的檢測；移植后3、6、9周對標(biāo)本進行大體形態(tài)、組織學(xué)觀察及圖像分析、生物力學(xué)測試。 結(jié)果：1.采用梯度密度離心法

3、分離結(jié)合貼壁篩選法可獲得較高純度和活性的BM-SCs，并能大量增殖；2.終濃度為10μmol/L和孵育48hBrdU標(biāo)記率>80％，且可以連續(xù)檢測到，提示BrdU標(biāo)記可用于BMSCs移植人體內(nèi)后存活、生長和分化的動態(tài)觀察；3。54只鼠均進入結(jié)果分析。①移植后2周內(nèi)A、B兩組與C組白細胞分類計數(shù)結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，表明豬小腸粘膜下層作為異種移植材料沒有明顯免疫排斥；②經(jīng)免疫組化和天狼星紅染色圖像分析結(jié)果可知：術(shù)后3組均表

4、現(xiàn)為成纖維細胞的移人并逐漸增多，細胞形態(tài)經(jīng)歷了從修復(fù)早期到修復(fù)中晚及晚期改變，分泌膠原組織逐漸增多，SIS和自體跟腱均經(jīng)歷了逐漸降解，且同時被新生膠原組織替代的過程。A、B兩組I型膠原含量逐漸增多，III型膠原含量逐漸減少；A組在移植術(shù)后9周時I型膠原含量明顯高于B組(P<0.05)、III型膠原含量要少于B組(P<0.05)；A組在術(shù)后9周時I型及III型膠原含量與C組接近。結(jié)果表明，SIS復(fù)合BMSCs組修復(fù)替代結(jié)果明顯優(yōu)于單純SI

5、S組，與自體肌腱移植組接近。在術(shù)后9周時SIS復(fù)合BMSCs組肉眼下豬小腸粘膜下層形態(tài)與正常肌腱已基本相同，光鏡下豬小腸粘膜下層已被新生的肌腱所完全替代，成纖維細胞沿長軸方向有序排列且出現(xiàn)大量的膠原細胞外間質(zhì)；③在生物力學(xué)測試中，3組均表現(xiàn)為抗負荷強度逐漸增強的過程，在移植后9周時A組生物力學(xué)強度(52.17±2。43N)要明顯優(yōu)于B組(46.75±2.89N)，P<0.05，基本接近C組(55.78±2.14N)，P<0.05；④電鏡