犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合Bio-gide膠原膜修復(fù)股骨頭軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:擬研究以Bio-gide膠原膜作為細(xì)胞支架復(fù)合自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BoneMarrow Stromal Cells，BMSCs)修復(fù)犬股骨頭軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)可行性。
　　 方法:該實(shí)驗(yàn)于2012/05/30-2013/1/30在大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室完成，(1)每只犬在髂嵴抽取骨髓，分離自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并行體外培養(yǎng)及鑒定。(2)將犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與Bio-gide膠原膜體外共培養(yǎng)，通過電鏡觀察。(3)將18只犬

2、制作成雙側(cè)股骨頭負(fù)重區(qū)關(guān)節(jié)軟骨缺損模型，并隨機(jī)分3組，實(shí)驗(yàn)組:BMSCs復(fù)合Bio-gide膠原膜修復(fù)股骨頭負(fù)重區(qū)軟骨缺損;對(duì)照組:單純Bio-gide膠原膜修復(fù)股骨頭負(fù)重區(qū)軟骨缺損;空白組:股骨頭負(fù)重區(qū)軟骨缺損不做任何處理。(4)各組于術(shù)后12周處死動(dòng)物，處死后對(duì)修復(fù)的股骨頭軟骨缺損處取組織標(biāo)本，行大體形態(tài)學(xué)觀察評(píng)分、組織學(xué)染色評(píng)分（HE染色和Masson三色染色）、Ⅱ型膠原免疫組化檢查及透射電鏡觀察，根據(jù)關(guān)節(jié)軟骨大體形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)與組織

3、學(xué)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:(1)第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞鏡下觀察:BMSCs生長(zhǎng)形態(tài)良好，呈梭形或多角形，行HE染色、免疫熒光染色、電鏡觀察鑒定證實(shí)。(2)通過電鏡觀察體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能很好地貼附于膠原膜的粗糙面，細(xì)胞擴(kuò)增并能復(fù)層生長(zhǎng)。(3)術(shù)后12周取標(biāo)本行大體形態(tài)學(xué)觀察，實(shí)驗(yàn)組修復(fù)處呈類透明軟骨樣修復(fù)，對(duì)照組缺損處呈纖維組織樣填充，空白組缺損處未見有效修復(fù)。組織學(xué)染色（HE染色和Masson三色染色）見實(shí)

4、驗(yàn)組修復(fù)組織更接近軟骨組織，細(xì)胞排列不規(guī)律，比正常軟骨細(xì)胞略小，表層細(xì)胞呈梭形或橢圓形，大多數(shù)橫向排列，深層細(xì)胞呈圓形或橢圓形，有軟骨陷窩形成，修復(fù)區(qū)兩側(cè)與周圍軟骨愈合好;對(duì)照組修復(fù)組織主要為纖維結(jié)締組織，周圍軟骨退變明顯;空白組缺損處未見組織修復(fù)，偶見纖維組織部分充填。實(shí)驗(yàn)組的修復(fù)組織Ⅱ型膠原免疫組化染色見修復(fù)組織細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)Ⅱ型膠原表達(dá)陽(yáng)性，細(xì)胞中出現(xiàn)大量黃褐色或黃色顆粒;透射電鏡觀察修復(fù)組織中細(xì)胞類似于軟骨細(xì)胞，呈橢圓形，細(xì)胞