自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合同種異體脫鈣骨基質(zhì)修復(fù)軟骨缺損的前期研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)兔自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)并向軟骨細(xì)胞分化，探討其與兔同種異體脫鈣骨基質(zhì)(decalcified bone matrix，DBM)體外相結(jié)合培養(yǎng)的可行性，為下一步將細(xì)胞支架復(fù)合物植入兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損做準(zhǔn)備。 方法：抽取兔骨髓液，分離純化骨髓液中的間充質(zhì)干細(xì)胞。取擴(kuò)增傳代至第3代的BMSCs分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組用1

2、0％胎牛血清的LG-DMEM 培養(yǎng)液加入轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)和地塞米松聯(lián)合誘導(dǎo)，對(duì)照組用10％胎牛血清的LG—DMEM培養(yǎng)液自然分化。在誘導(dǎo)4天、7天、14天后，分別用甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞蛋白多糖的表達(dá)，Ⅱ型膠原免疫組化染色檢測(cè)細(xì)胞Ⅱ型膠原的表達(dá)并計(jì)算陽性率。制備兔DBM，采用液體置換法檢測(cè)經(jīng)脫鈣2天、3天、4天支架材料的孔隙率。掃描電鏡觀察DBM的超微結(jié)構(gòu)，以及

3、細(xì)胞與DBM體外結(jié)合培養(yǎng)3天的粘附情況。 結(jié)果：BMSCs取材方便，體外培養(yǎng)生長穩(wěn)定，細(xì)胞活性好。實(shí)驗(yàn)組BMSCs向軟骨細(xì)胞分化，細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色異染，Ⅱ型膠原免疫組化染色陽性率與對(duì)照組相比有顯著性差異。脫鈣3天的DBM多孔結(jié)構(gòu)及空隙適合細(xì)胞的粘附和增殖。細(xì)胞和DBM體外培養(yǎng)粘附良好。 結(jié)論：兔自體BMSCs取材方便，細(xì)胞活性好，經(jīng)體外誘導(dǎo)后可以向軟骨細(xì)胞分化。兔同種異體DBM制備方便，具有良好的生物學(xué)特性，兩者體外結(jié)合