扇貝多肽對(duì)單次UVA氧化損傷人HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞和無毛小鼠皮膚的保護(hù)作用機(jī)制.pdf

1、目的 探討在單次長波紫外線(UVA)輻射下,扇貝多肽(PCF)對(duì)人HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞和昆明種無毛小鼠皮膚氧化損傷的保護(hù)作用機(jī)制.方法采用海洋生物工程技術(shù),從櫛孔扇貝中提取PCF,Mr=879.建立UVA氧化損傷細(xì)胞和無毛小鼠的病理模型,輻射強(qiáng)度分別為:細(xì)胞5J/cm<'2>;無毛小鼠4.13J/cm<'2>.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為7組:對(duì)照組,UVA模型組,UVA+0.125％PCF組,UVA+0.25%PCF組,UVA+0.5%PCF組

2、,UVA+1%PCF組,和UVA+0.1%VitC組.MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性;酶生化法測(cè)定胞漿超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及細(xì)胞抗超氧陰離子能力(A-SAC)、總抗氧化能力(T-AOC);流式細(xì)胞儀PI染色法測(cè)定細(xì)胞的凋亡率;Fluo-3-AM為熒光染料測(cè)定細(xì)胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<,i>;Rhodamine 123為熒光染料測(cè)定線粒體膜電位(△ψM);透射電鏡

3、觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變;彗星電泳法檢測(cè)DNA的損傷程度;原位雜交技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)p21mRNA的變化.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為5組:對(duì)照組,UVA模型組,UVA+5%PCF組,UVA+20%PCF組,UVA+10%Vit C組.免疫組化法測(cè)定皮膚p53基因蛋白表達(dá)、表皮生長因子受體(EGFR)表達(dá)、P物質(zhì)、Ⅰ型膠原及Ⅳ型膠原的含量.結(jié)論扇貝多肽對(duì)單次UVA(5J/cm<'2>)誘導(dǎo)的人HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞氧化損傷有保護(hù)作用.其機(jī)制與清除氧自由基