三氯乙烯對人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞線粒體損傷及銀杏葉提取物的保護(hù)作用研究.pdf

1、研究目的：本研究通過觀察TCE對體外培養(yǎng)的人原代KC線粒體的損傷作用，并探討 GBE 的保護(hù)作用，以期深入揭示TCE的皮膚細(xì)胞毒性機制，為防治 TCE 皮膚損害和開發(fā)有效的防護(hù)用品提供理論依據(jù)。 研究方法：體外分離的人原代KC，用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。分別給予以不同濃度(0.125、0.5和2.0 mmol/L)的TCE處理，同時設(shè)培養(yǎng)基(空白)對照組和體積濃度為1％的丙酮(溶劑)對照組；GBE保護(hù)試驗則以不同濃度(10、50、

2、100、150 mg/L)的GBE預(yù)處理細(xì)胞2 h后再用2.0 mmol/L TCE進(jìn)行染毒。分別從功能和形態(tài)兩個方面檢測線粒體的變化。①MTT法檢測細(xì)胞活力和線粒體酶抑制率的變化；②通過測定細(xì)胞ATP酶活力來反映其能量代謝功能的變化；③羅丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)染色后利用流式細(xì)胞儀檢測線粒體膜電位(ΔΨ<,m>)的改變；④透射電子顯微鏡觀察線粒體形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：①細(xì)胞活力的變化：染毒時間為4 h和8 h時

3、，0.5和2.0 mmol/L TCE組細(xì)胞活力較對照組明顯降低(P<0.01)，當(dāng)染毒時間大于12 h，三個劑量組與對照組比較均有差異(P<0.01)，且隨著染毒濃度的提高細(xì)胞活力呈劑量依賴性地降低；GBE保護(hù)組細(xì)胞活力較TCE染毒陽性組明顯升高(P<0.01)，GBE濃度提高到100和150 mg/L 時，細(xì)胞活力與溶劑對照組差異無顯著性(P>0.05)。②線粒體酶抑制率改變：染毒4 h和8 h時，0.5和2.0 mmol/L TC

4、E組線粒體酶抑制率較對照組明顯增加(P<0.01)，染毒時間>12 h，三個劑量組與對照組比較均有差異(P<0.01)，且呈劑量－效應(yīng)關(guān)系：GBE保護(hù)后線粒體酶抑制率下降(P<0.01)，100 mg/L 以上的GBE保護(hù)后線粒體酶抑制率與溶劑對照組差異無顯著性(P>0.05)。③細(xì)胞ATP酶活力變化：TCE處理4 h細(xì)胞ATP酶活力無變化，處理8 h，2.0 mmol/L 組低于對照組，TCE作用時間大于12 h，0.125、0.5和

5、2.0 mmol/L 組ATP酶活力與對照組比較差異均有顯著性；10 mg/L GBE保護(hù)組ATP酶活力與TCE染毒組差異無顯著性，50、100、150 mg/L GBE保護(hù)組ATP酶活力較TCE染毒組升高，其中100和150 mg/L GBE保護(hù)組與溶劑對照組差異無顯著性(P>0.05)。④ΔΨ<,m>改變；2.0 mmol/L TCE染毒4、8、12和24 h，Rh123熒光強度較對照組下降，Rh123<'->/PI<'->細(xì)胞群的

6、比例較對照組增加，8 h后變化趨于穩(wěn)定，12和24 h組與8 h組比較差異無顯著性。GBE保護(hù)組Rh123熒光強度較TCE染毒陽性組明顯升高，Rh123<'->PI<'->細(xì)胞群比例下降(P<0.01)，100和150 mg/L 保護(hù)組，兩指標(biāo)與對照組差異均無顯著性(P>0.05)。⑤線粒體形態(tài)學(xué)改變：電鏡下TCE處理組線粒體出現(xiàn)腫脹，空泡變性，基質(zhì)減少，部分嵴消失，正常對照組和GBE保護(hù)組線粒體結(jié)構(gòu)完整，基質(zhì)分布均勻，可見線粒體嵴。