柑橘精油抗氧化特性及對(duì)皮膚細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、本研究從夏橙、椪柑、檸檬、蜜柑果皮中提取精油，對(duì)精油成分構(gòu)成進(jìn)行差異分析，采用高速逆流色譜(HSCCC)分離椪柑精油主要成分;以兩種體外抗氧化測(cè)試方法評(píng)價(jià)柑橘精油及其主要成分的抗氧化特性;構(gòu)建人皮膚成纖維細(xì)胞氧化損傷模型以探究精油及活性成分對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用，以期為柑橘精油在護(hù)膚方向的應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。全文主要結(jié)果如下:
　　1.柑橘精油的提取分離及成分差異分析
　　采用壓榨法和水蒸汽蒸餾法提取果皮精油，以氣相色譜-質(zhì)譜

2、聯(lián)用(GC-MS)鑒定精油成分并進(jìn)行差異分析。
　　(1)水蒸汽蒸餾法精油提取率高于壓榨法，且前者提取的精油成分中含氧化合物比例明顯高于壓榨精油。精油樣品中共鑒定出48種揮發(fā)性成分，不同柑橘品種和提取方法獲取的精油其成分構(gòu)成和相對(duì)含量都有所差異。α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯和金合歡烯在所有精油樣品中都被檢出，同時(shí)，每個(gè)品種精油都具有獨(dú)特的標(biāo)記成份可區(qū)別于其它品種。
　　(2)采用高速逆流色譜法分離椪柑壓榨精油，篩選出石油醚-乙

3、腈-丙酮(5∶3∶2)作為溶劑體系，分離得到β-月桂烯、檸檬烯和γ-松油烯三種成分，其中β-月桂烯濃度由3.8％提高到64.9％，檸檬烯濃度由74.9％提高到87.1％，γ-松油烯濃度由9.7％提高到50.5％。
　　2.柑橘精油抗氧化特性評(píng)價(jià)
　　采用DPPH自由基清除法和TBARS法評(píng)價(jià)柑橘精油及十種主要成分的抗氧化特性。柑橘精油清除DPPH自由基的能力和抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力呈現(xiàn)出濃度依賴性，四個(gè)品種中椪柑精油效果最優(yōu)。精油

4、的抗氧化活性與成分中萜烯化合物與含氧化合物的比值相關(guān)?？傮w上，柑橘精油及其活性成分在TBARS試驗(yàn)中比在DPPH自由基清除試驗(yàn)中表現(xiàn)出更低的EC50值。兩種單萜烯，γ-松油烯和萜品油烯在濃度為100μL/mL時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率分別達(dá)到了75.8％和64.2％，其抗氧化指數(shù)分別為94.8％和88.2％，活性與抗氧化劑BHT接近。
　　3.柑橘精油對(duì)皮膚細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究
　　(1)精油濃度＞0.3μL/mL時(shí)

5、會(huì)顯著降低細(xì)胞存活率，低于該濃度的精油整體上表現(xiàn)一定程度的細(xì)胞增殖作用。單體成分中除α-蒎烯和3-蒈烯對(duì)細(xì)胞有較大毒性外，其它成分表現(xiàn)出不同程度的細(xì)胞增殖作用，并確定以含量豐富且活性較高的檸檬烯和γ-松油烯進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　(2)以外源性過(guò)氧化氫構(gòu)建人皮膚成纖維細(xì)胞氧化損傷模型，采用MTT法研究過(guò)氧化氫對(duì)細(xì)胞存活率的影響。結(jié)果表明:過(guò)氧化氫能夠顯著降低細(xì)胞活力且與濃度正相關(guān)，根據(jù)細(xì)胞存活率結(jié)果最后確定氧化損傷誘導(dǎo)條件為:0.65

6、mM/0.33mM過(guò)氧化氫誘導(dǎo)6h。
　　(3)椪柑精油預(yù)處理對(duì)成纖維細(xì)胞的損傷有一定的防護(hù)作用，使細(xì)胞活力從54.9％增加到58.8-71.9％。而精油與過(guò)氧化氫共孵育試驗(yàn)中，0.1μL/mLγ-松油烯表現(xiàn)出最佳的保護(hù)效果，使細(xì)胞活力從24.5％恢復(fù)到83.1％。兩組試驗(yàn)中椪柑精油及其活性組分都顯著降低了細(xì)胞中MDA含量，且抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力得到不同程度的提高。揭示精油可能通過(guò)直接清除活性氧自由基而降低細(xì)胞