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文檔簡介
1、RNA廣泛存在于生命活動的各個過程,并在其中發(fā)揮著重要的功能。但是,人們對細胞外RNA(extracellular RNA,eRNA)還知之甚少。microRNA(miRNA)的發(fā)現(xiàn)使我們對基因表達調(diào)控有了一個全新的認識,但是miRNA前體的加工途徑的精細過程還不是很清楚。 為了探索細胞外RNA的生物學功能,本研究以HepG2細胞為研究模型,通過RNA酶A的對細胞的離散作用及RNA抗體的細胞免疫熒光實驗驗證了細胞表面RNA分子的
2、存在,研究了細胞培養(yǎng)液中RNA含量的變化。通過凍干法富集了細胞培養(yǎng)液中的RNA,并采用本室建立的RNA克隆方法對其進行了克隆。同時我們利用酵母三雜交技術篩選了本室克隆出的新的microRNA-48前體的相互作用蛋白。本研究取得的具體進展如下: 1.用RNA抗體細胞免疫熒光檢測,證實了HepG2細胞表面存在RNA分子。 2.發(fā)現(xiàn)RNA酶A能使HepG2細胞離散,遷移能力增強,細胞表面?zhèn)巫阍黾印?3.檢測了HepG2
3、細胞生長過程中培養(yǎng)液中和細胞表面RNA含量的變化。 4.建立了凍干濃縮提取細胞培養(yǎng)液中RNA的方法,并建立了細胞培養(yǎng)液RNA克隆方法,得到了若干條細胞培養(yǎng)液中的RNA,其中包括rRNA片段、人延伸因子1α亞單位、線粒體RNA片段和立克次氏體RNA,其中一條位于15號染色體CpG島區(qū)的28nt的RNA與新發(fā)現(xiàn)的piRNA有很高的相似性。 5.用酵母三雜交技術得到了microRNA-483前體候選相互作用蛋白,其中C140F
4、R108和ZNF43得到了回轉(zhuǎn)驗證。 RNA在生命活動中的作用已經(jīng)得到了人們的認可。細胞外RNA的研究也已經(jīng)初見端倪,本研究以證實了細胞外RNA的存在,建立了細胞外液RNA的提取和克隆方法,獲得了一些有特點的RNA;為細胞外RNA的研究建立了新的方法??梢杂糜诩膊〉臋z測,同時為深入研究RNA在生命活動過程中的作用奠定了良好的基礎。通過酵母三雜交技術篩選了與microRNA-483相互作用的蛋白質(zhì),為microRNA-483的加工
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