hAECs對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及其與NF-κBp65的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是一種常見(jiàn)的臨床綜合癥，其特點(diǎn)是頑固性低氧血癥、進(jìn)行性呼吸困難和非心源性肺水腫等。多種肺內(nèi)外因素可引起急性肺損傷的發(fā)生，目前認(rèn)為過(guò)度的炎癥反應(yīng)和抗炎失衡在其中發(fā)揮重要作用，但是具體發(fā)病機(jī)制還未完全闡明。臨床上仍以支持治療為主，病死率依然很高。核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）是一組真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，參與多種細(xì)胞活動(dòng)，具有關(guān)鍵的生物學(xué)功能，

2、尤其是調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。大量炎癥因子的表達(dá)均與NF-κB的活化密切相關(guān)。可以說(shuō)NF-κB在炎癥的發(fā)生發(fā)展中處于關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此，抑制了NF-κB就能有效的抗炎，減輕肺損傷。
　　人羊膜上皮細(xì)胞（human amnion epithelial cells，hAECs）是羊膜上一層單層立方或柱狀細(xì)胞，與羊水直接相接觸。hAECs表達(dá)階段特異性胚胎抗原-4（stage-specific embryonic antigen-4，

3、SSEA-4）、SSEA-3、關(guān)鍵蛋白（NANOG）和八聚體物結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-4（octamer-binding transcription factor-4，OCT-4）等分子標(biāo)志物，具有胚胎干細(xì)胞特性。hAECs具有向三個(gè)胚層組織細(xì)胞分化的能力，此外，hAECs不表達(dá)或很少表達(dá)Ⅰ型和Ⅱ型人類白細(xì)胞抗原，而且還表達(dá)免疫抑制型的人體白細(xì)胞抗原G，從而使hAECs具有很強(qiáng)的免疫豁免能力，在疾病治療方面顯示出很大的潛能。我們通過(guò)氣管內(nèi)給予脂多

4、糖（lipopolysaccharide，LPS）建立小鼠ALI模型，經(jīng)氣管內(nèi)滴注hAECs進(jìn)行治療，探討hAECs對(duì)急性肺損傷小鼠模型的治療作用及其可能的機(jī)制。
　　目的：
　　（1）明確人羊膜上皮細(xì)胞（hAECs）是否對(duì)LPS所致急性肺損傷有治療作用。
　　（2）明確人羊膜上皮細(xì)胞（hAECs）對(duì)NF-κBp65的影響，人羊膜上皮細(xì)胞的應(yīng)用是否能減少NF-κBp65的表達(dá)，從而減輕肺損傷的炎癥。
　　方法：健

5、康成年雄性 C57BL/6小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組（Control）、hAECs對(duì)照組（hAECs）、模型組（LPS）和hAECs治療組（LPS+hAECs），每組10只。模型組（LPS）的小鼠經(jīng)口咽無(wú)創(chuàng)插管緩慢滴注LPS5mg/kg，1h后再注入PBS（50μl）；hAECs治療組（LPS+hAECs）的小鼠經(jīng)口咽無(wú)創(chuàng)插管緩慢滴注LPS5mg/kg，1h后再注入hAECs（1×107/ml，50μl）；hAECs對(duì)照組和正常對(duì)照組則經(jīng)口

6、咽插管注入等量hAECs或PBS。經(jīng)過(guò)LPS處理后24h，正常處死小鼠，從心臟處收集血液并收集肺臟組織，右肺部分組織用來(lái)計(jì)算肺組織濕/干質(zhì)量（W/D）比值；部分用于檢測(cè)肺組織髓過(guò)氧化物酶（ MPO）活性；余下肺組織用來(lái)提取細(xì)胞漿/細(xì)胞核蛋白；左肺用于HE染色觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清中IL-6、IL-1β、IL-10及TNF-α含量；Western blot法檢測(cè)肺組織核轉(zhuǎn)錄因子-κBp65（NF

7、-κBp65）蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　與正常對(duì)照組相比，LPS處理后小鼠肺組織W/D增大，血清中IL-6、IL-1β及TNF-α含量增加(P＜0.05)，而IL-10的含量卻有所減少(P＜0.05)；MPO活性明顯增高；光學(xué)顯微鏡下觀察，可見(jiàn)肺組織微血管破壞、肺泡間隔增厚、發(fā)生肺水腫、并有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)滲出的紅細(xì)胞，與ALI的病理變化相吻合；上述各項(xiàng)結(jié)果都表明經(jīng)口咽插管滴注LPS誘導(dǎo)小鼠ALI的模型建立成功

8、。應(yīng)用hAECs后，我們發(fā)現(xiàn)hAECs可以減小LPS導(dǎo)致的肺W/D比值；血清中炎癥因子IL-6、IL-1β及TNF-α含量有一定的降低（P＜0.05），炎癥因子IL-10水平則表現(xiàn)為上升（P＜0.05）；MPO活性降低；病理變化方面，hAECs明顯改善LPS造成的肺組織損傷，肺水腫減輕，炎癥反應(yīng)減弱；表明hAECs在LPS誘導(dǎo)的ALI中有保護(hù)性作用。LPS處理組肺組織細(xì)胞漿中NF-κBp65蛋白比對(duì)照組中明顯減少（P＜0.05），而其在

9、細(xì)胞核中的含量明顯增加（P＜0.05）；LPS+hAECs組肺組織細(xì)胞漿中NF-κBp65蛋白比LPS處理組有所增加，而細(xì)胞核中的NF-κBp65蛋白含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果提示hAECs在一定程度上抑制了NF-κBp65的核轉(zhuǎn)位。
　　結(jié)論：
　　（1）hAECs可顯著減輕LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷。
　?。?）hAECs減輕急性肺損傷的作用可能與降低肺組織中NF-κBp65的活性，減少炎