消癌平對(duì)p53缺陷肺癌細(xì)胞的效應(yīng)及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　消癌平注射液是通關(guān)藤提取制劑，有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。肺癌是當(dāng)前世界上死亡率居首位的惡性腫瘤，其中約85％為非小細(xì)胞肺癌。腫瘤抑制因子p53缺陷在肺癌中多見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究了蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶SET7/9表達(dá)變化對(duì)p53缺陷的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生物效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)SET7/9上調(diào)會(huì)抑制凋亡，反之，SET7/9下調(diào)會(huì)促進(jìn)凋亡。本研究擬觀察消癌平制劑對(duì)p53缺陷的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)效應(yīng)，并探討相應(yīng)機(jī)制包括是否涉及SET

2、7/9分子變化。
　　方法:
　　選擇p53缺陷的非小細(xì)胞肺癌A549、NCI-H1299細(xì)胞株為研究對(duì)象，分別設(shè)置藥物處理組為實(shí)驗(yàn)組，藥物未處理組為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組消癌平制劑處理濃度分別為30.0、50.0、80.0 mg/mL，處理時(shí)間分別為24h、48h、72h。對(duì)照組以相同體積的生理鹽水處理。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及形態(tài)變化，CCK-8試劑檢測(cè)細(xì)胞增殖，Hoechst33342染色與AnneinⅤ-FITC/PI

3、雙染法檢測(cè)凋亡情況，流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞周期，Western Blot檢測(cè)SET7/9、p65、p21蛋白水平。
　　結(jié)果:
　　與對(duì)照組比較，鏡下可見(jiàn)藥物處理NCI-H1299與A549兩株細(xì)胞48h，細(xì)胞生長(zhǎng)密度均下降且皆出現(xiàn)形態(tài)變化，80.0mg/mL的藥物濃度處理NCI-H1299細(xì)胞時(shí)細(xì)胞多呈懸浮狀態(tài)，但Hoechst33342染色檢測(cè)未見(jiàn)核固縮深染細(xì)胞增加。CCK-8檢測(cè)表明兩株細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組存活率降低，均呈藥物濃度或

4、時(shí)間依賴性增殖抑制，藥物處理NCI-H1299細(xì)胞24h、48h、72h時(shí)，細(xì)胞半數(shù)致死濃度(IC50)分別為60.0、37.6、31.0 mg/mL;藥物處理A549細(xì)胞24h、48h、72h時(shí)的IC50分別為90.1 mg/mL、74.5、64.1 mg/mL。不同濃度藥物(30.0、50.0、80.0mg/mL)分別處理48h，兩株培養(yǎng)細(xì)胞凋亡率均無(wú)明顯變化，NCI-H1299細(xì)胞的S期百分比分別為44.1±0.4、51.7±2.

5、0、59.8±3.8，A549細(xì)胞S期百分比分別為21.8±4.8、25.5±0.6、32.8±0.9（與各自對(duì)照組42.3±0.8、21.5±5.8比較，除30.0mg/mL的藥物濃度處理外，均P＜0.05）;Western Blot檢測(cè)表明隨藥物處理濃度增加，兩株細(xì)胞p21含量均增加，而SET7/9、p65含量均降低。
　　結(jié)論:
　　(1)通關(guān)藤提取物消癌平制劑對(duì)p53缺陷的非小細(xì)胞肺癌NCI-H1299、A549細(xì)胞