ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)的建立及其臨床應(yīng)用研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)的建立及其臨床應(yīng)用研究姓名：傅軍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：張偉2003.5.1中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)的建立及其臨床應(yīng)用研究中文摘要目的：建立ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)，并探討其對腫瘤臨床治療的指導(dǎo)意義。方法：采用基因克隆、基因定點(diǎn)突變、發(fā)酵和層析技術(shù)，生產(chǎn)具有較高熱穩(wěn)定性和發(fā)光效率的重組熒光酶作為該檢測技術(shù)的核

2、心酶試劑：通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)篩選出具有使腫瘤細(xì)胞在體外選擇性生長功能的培養(yǎng)基；以自產(chǎn)試劑為核心試劑建立ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)，以卵巢癌為研究模型進(jìn)行卵巢癌體外藥敏檢測，研究該體外藥敏檢測方法與臨床療效的相關(guān)性。結(jié)果：突變熒光酶M245在熱穩(wěn)定性和發(fā)光效率方面優(yōu)于野生型熒光酶，其在檢測敏感性、特異性、線性關(guān)系方面與國外試劑盒用酶相同：腫瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基在所需培養(yǎng)時間內(nèi)能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長，同時還能抑制正常細(xì)胞生長，促進(jìn)其死亡，

3、體現(xiàn)了較好的選擇性；建立該技術(shù)核心試劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)；ATPTCA檢測技術(shù)與常規(guī)MTT法相比，具有相關(guān)性好(r=O9981)，量程跨越4個數(shù)量級(10—80000個細(xì)胞)，檢測敏感程度高(最小檢測lO個細(xì)胞)的優(yōu)點(diǎn)；34例卵巢癌體外藥敏檢測表明，ATPTCA法可反映不同病人對各抗腫瘤藥物的敏感性的個體差別，其結(jié)果與臨床療效及相關(guān)臨床資料有較好的吻合性：整體預(yù)測值906％，陽性預(yù)測值947％，陰性預(yù)測值846％，敏感性90％，特異性917

4、％。結(jié)。論：ATP生物熒光體外腫瘤藥敏檢測技術(shù)是一種較好的體外藥敏檢測方法，標(biāo)本可評價率高，檢測結(jié)果與臨床療效及相關(guān)臨床資料有較好的吻合性。該藥敏檢測方法對抗腫瘤藥物篩選和應(yīng)用、臨床藥物新適應(yīng)癥研究、化療方案篩選和評估以及推廣個體化治療具有實(shí)際指導(dǎo)意義。以自產(chǎn)熒光酶及選擇性培養(yǎng)基為核心試劑建立ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)填補(bǔ)了國內(nèi)在該領(lǐng)域的空白，并申請發(fā)明專利一項(已獲受理)。關(guān)鍵詞：ATP生物熒光技術(shù)，體外藥敏檢測，基因克隆，突