用鼠尾膠原建立膠滴腫瘤藥敏檢測技術(shù)及在宮頸癌的初步應(yīng)用.pdf

1、目的：用自制鼠尾膠原建立膠滴腫瘤藥敏檢測技術(shù)(collagen gel droplet culture-drug sensitivity test，CD-DST)，探討該技術(shù)在腫瘤藥物敏感性檢測中的應(yīng)用價值，從而為臨床化療方案的篩選提供一條有效途徑。
　　 方法：首先，構(gòu)建體外細(xì)胞培養(yǎng)的三維立體模型，即將Hela細(xì)胞加至由自制鼠尾膠原、10×F12培養(yǎng)基以及0.5mol/L的NaOH溶液混合形成的膠原混合液中并使其凝固，形成利于

2、細(xì)胞生長的鼠尾膠原凝膠滴，并觀察培養(yǎng)在此模型內(nèi)細(xì)胞的生長形態(tài)與二維培養(yǎng)形態(tài)學(xué)上的不同；進(jìn)一步，建立膠滴腫瘤藥敏檢測技術(shù)（CD-DST），該技術(shù)主要包括Hela細(xì)胞在膠滴內(nèi)培養(yǎng)、化療藥物處理、無藥培養(yǎng)和圖像分析四部分內(nèi)容，同時與MTT檢測法進(jìn)行相關(guān)性比較；最后，將該技術(shù)初步應(yīng)用于12例活檢宮頸癌標(biāo)本的體外藥敏檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1、細(xì)胞-鼠尾膠原混合液置于37℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5％的飽和濕度培養(yǎng)箱中15min即可

3、凝固，形成鼠尾膠原凝膠滴（即三維立體模型），培養(yǎng)在其內(nèi)的Hela細(xì)胞生長良好，呈克隆樣增殖，細(xì)胞以團(tuán)塊狀分散在膠滴內(nèi)；二維培養(yǎng)的細(xì)胞呈不規(guī)則多邊形，以單細(xì)胞形式平鋪分散樣生長。
　　 2、用鼠尾膠原成功建立了膠滴腫瘤藥敏檢測技術(shù)(CD-DST)，兩種不同的方法對Hela細(xì)胞進(jìn)行藥敏檢測時發(fā)現(xiàn)CD-DST法所測的藥物抑制率明顯高于MTT法(P<0.05)，但兩者的體外藥敏結(jié)果有較好的一致性。
　　 3、12例宮頸癌標(biāo)本通過

4、CD-DST法進(jìn)行藥敏檢測，其中6例標(biāo)本培養(yǎng)成功并用于藥敏檢測，標(biāo)本可評價率為50％（6/12）；不同標(biāo)本對化療藥物的敏感性不同，體現(xiàn)了腫瘤患者之間存在個體差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、本研究建立了體外細(xì)胞培養(yǎng)的三維立體模型，該模型的建立對于觀察細(xì)胞在模擬類似人體環(huán)境中的生長狀態(tài)和增殖方式提供了一個直觀、可靠的體外培養(yǎng)模型，同時為以后研究癌細(xì)胞在體內(nèi)的生長、轉(zhuǎn)移、耐藥及抗癌藥物敏感性檢測等方面奠定了基礎(chǔ)。