人fg12凝血酶原酶基因的克隆、表達及其生物學功能的初步研究.pdf

1、為了今后對fg12凝血酶原酶作更深入的研究,該實驗擬應用分子生物學方法,克隆及表達fg12凝血酶原酶基因,并對其功能作初步的探討.第一部分中國漢族人fg12凝血酶原酶基因的克隆和序列分析;目的:克隆中國漢族人fg12凝血酶原酶cDNA,了解其序列與歐美人種(白人)有無差異,為今后的研究奠定基礎.結論:成功地克隆了中國人fg12凝血酶原酶cDNA,其序列與國外報道一致;構建了pcDNA3-fg12真核表達載體.第二部分人fg12凝血酶原酶

2、基因的真核表達及其功能的初步研究;目的:將人fg12凝血酶原酶基因的真核表達載體pcDNA3-fg12,轉(zhuǎn)染HL-60細胞,使其在該細胞株中瞬時表達,研究其凝血有關的生物學活性.結論:成功地在HL-60細胞中將fg12凝血酶原酶進行了瞬時表達;fgl2凝血酶原酶在胞漿中表達,在細胞膜上無分布并可能排泌到細胞外;凝血分析顯示fg12凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的活性.第三部分fg12凝血酶原酶基因FRED段在大腸桿菌中的表達;目的:建立

3、fg12凝血酶原酶纖維蛋白原相關結構域(FRED段)的原核高效表達系統(tǒng),為制備抗fg12抗體及進一步研究其生物學功能創(chuàng)造條件.結論:成功地獲得了fg12凝血酶原酶的FRED段的基因表達產(chǎn)物,構建了FRED- pET22b原核表達質(zhì)粒,并在大腸桿菌中獲得了高效表達. 第四部分外周血單個核細胞中fg12凝血酶原酶基因表達的初步研究;(1)RT-PCR檢測外周血單個核細胞中fg12凝血酶原酶mRNA的表達;目的:建立半定量檢測外周血單個核細胞

4、中mRNA表達水平的RT-PCR方法,探討fg12凝血酶原酶在正常人PBMNC中的表達及其規(guī)律.結論:建立了半定量檢測外周血單個核細胞中mRNA表達水平的RT-PCR方法,PBMNC中的fg12凝血酶原酶在體外培養(yǎng)體系中不能持續(xù)表達.(2)重型肝炎患者fg12凝血酶原酶基因的表達. 目的:探討重型肝炎患者外周血單個核細胞(PBMNC)中fg12凝血酶原酶mRNA的變化及其意義.結論:重型肝炎患者的肝壞死可能與fg12凝血酶原酶的高表達有