CG-6樹脂吸附分離人凝血酶原復合物的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、人凝血酶原復合物濃制劑(Prothrombin Complex Concentrate,PCC,亦稱PPSB)是一種主要含有凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和X的血液制品,泛稱因子Ⅸ濃制劑。PCC是乙型血友病的重要治療替代藥物,目前主要用進口DEAE SephadexA50葡聚糖類凝膠型樹脂以批式吸附的方法來制備。由于凝膠型樹脂機械強度差、生產過程中損失率高、間歇開放性生產操作繁瑣、容易染菌及操作人員的生物安全性等限制,使得現在PCC制品生產成本高,

2、限制了PCC制品的產量及其在臨床中的應用。因此,研制開發(fā)機械強度高、吸附性能優(yōu)良、成本低廉的人工合成分離介質并將其應用于連續(xù)、封閉的柱層析PCC純化的新工藝,以提高PCC制品的產量和質量并降低生產成本,就成為十分迫切和有意義的工作。 本文以PCC純制品為研究對象,首先對實驗室制備的不同大孔陰離子樹脂吸附PCC的靜態(tài)吸附量和吸附速率進行考察,篩選出了吸附性能優(yōu)良的CG-6樹脂并對其物性和結構進行了測定。然后考察了CG-6樹脂對PC

3、C的吸附平衡,計算并分析了吸附過程中的吸附動力學和熱力學行為,并研究了不同因素對固定床條件下CG-6吸附PCC的影響;最后對CG-6從血漿中分離純化PCC進行了初步研究。研究結果如下: 通過靜態(tài)吸附實驗,CG-6樹脂對PCC的吸附量達65.337mg/g,吸附率超過87%,遠高于其它其它合成樹脂;對CG-6樹脂的結構和物性測定結果表明,CG-6平均粒徑為165.89 μm,平均孔徑為153.57 nm,為典型的大孔樹脂結構。

4、 CG-6對PCC的吸附特性研究表明,CG-6適合在磷酸鹽緩沖環(huán)境中吸附PCC,緩沖液濃度、pH值和離子強度對吸附平衡有著較大的影響:pH值的升高有利于平衡吸附量的增大,而緩沖液濃度和離子強度的增大則降低了平衡吸附量;吸附平衡可以用Langmuir方程描述,吸附焓變?yōu)?15.1kJ/mol、熵變AS為2.37(15℃)、20.97(20℃)、23.11(25℃)、37.32(30℃)kJ·mol<'-1>·K<'-1>,吉布斯自由能

5、變化AG分別為-0.54(15℃)、-5.93(20℃)、-6.66(25℃)、-11.20(30℃)kJ·mol<'-1>;用擬二級方程對吸附過程進行擬和,通過計算求得吸附反應速率常數為0.00103g/mg.min; CG-6在固定床內對凝血酶原復合物(PCC)溶液的吸附穿透行為的考察結果表明:流速、進樣濃度和高徑比對PCC在CG-6上的吸附效率有著顯著影響,在考察范圍內,隨著流速的下降,吸附效率從51.45%增加到73.98%,而

6、進樣濃度的降低使吸附效率從32.14%增加到61.64%;高徑比的增加也會提高CG-6對PCC的吸附效率,但繼續(xù)增大高徑比則會降低樹脂的利用率。對CG-6吸附PCC機理的初步探討表明,CG-6樹脂帶有大量的離子交換基團,而吸附PCC所需的比表面積和孔結構并不占優(yōu)勢,因此,在CG-6吸附PCC過程中離子交換機理占有絕對的優(yōu)勢。通過對穿透過程中流出液pH值考察,表明CG-6在對PCC的吸附過程中孔結構和比表面積并不占優(yōu)勢,吸附機理以離子交換

7、為主。 初步考察CG-6對血漿中對PCC的分離純化效果,并對洗脫樣進行了活性測定,在0.8mol/L和1.2mol/L NaCl洗脫樣中PCC比活分別達到了0.383和1.08IU/mg,與原料血漿相比,PCC純化倍數可分別達到40倍和112倍,說明CG-6對血漿中的PCC有著較好的純化效果。 作為一種新型大孔陰離子交換樹脂,CG-6具有良好的蛋白吸附性能,可以作為一種蛋白質純化分離介質。通過對CG-6分離純化凝血酶原復

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