CG-6樹脂吸附分離人凝血酶原復(fù)合物的研究.pdf

1、人凝血酶原復(fù)合物濃制劑(Prothrombin Complex Concentrate，PCC，亦稱PPSB)是一種主要含有凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和X的血液制品，泛稱因子Ⅸ濃制劑。PCC是乙型血友病的重要治療替代藥物，目前主要用進(jìn)口DEAE SephadexA50葡聚糖類凝膠型樹脂以批式吸附的方法來制備。由于凝膠型樹脂機(jī)械強(qiáng)度差、生產(chǎn)過程中損失率高、間歇開放性生產(chǎn)操作繁瑣、容易染菌及操作人員的生物安全性等限制，使得現(xiàn)在PCC制品生產(chǎn)成本高，

2、限制了PCC制品的產(chǎn)量及其在臨床中的應(yīng)用。因此，研制開發(fā)機(jī)械強(qiáng)度高、吸附性能優(yōu)良、成本低廉的人工合成分離介質(zhì)并將其應(yīng)用于連續(xù)、封閉的柱層析PCC純化的新工藝，以提高PCC制品的產(chǎn)量和質(zhì)量并降低生產(chǎn)成本，就成為十分迫切和有意義的工作。 本文以PCC純制品為研究對象，首先對實驗室制備的不同大孔陰離子樹脂吸附PCC的靜態(tài)吸附量和吸附速率進(jìn)行考察，篩選出了吸附性能優(yōu)良的CG-6樹脂并對其物性和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了測定。然后考察了CG-6樹脂對PC

3、C的吸附平衡，計算并分析了吸附過程中的吸附動力學(xué)和熱力學(xué)行為，并研究了不同因素對固定床條件下CG-6吸附PCC的影響；最后對CG-6從血漿中分離純化PCC進(jìn)行了初步研究。研究結(jié)果如下： 通過靜態(tài)吸附實驗，CG-6樹脂對PCC的吸附量達(dá)65．337mg/g，吸附率超過87％，遠(yuǎn)高于其它其它合成樹脂；對CG-6樹脂的結(jié)構(gòu)和物性測定結(jié)果表明，CG-6平均粒徑為165．89 μm，平均孔徑為153．57 nm，為典型的大孔樹脂結(jié)構(gòu)。

4、 CG-6對PCC的吸附特性研究表明，CG-6適合在磷酸鹽緩沖環(huán)境中吸附PCC，緩沖液濃度、pH值和離子強(qiáng)度對吸附平衡有著較大的影響：pH值的升高有利于平衡吸附量的增大，而緩沖液濃度和離子強(qiáng)度的增大則降低了平衡吸附量；吸附平衡可以用Langmuir方程描述，吸附焓變?yōu)?15.1kJ/mol、熵變AS為2.37(15℃)、20.97(20℃)、23.11(25℃)、37.32(30℃)kJ·mol<'-1>·K<'-1>，吉布斯自由能

5、變化AG分別為-0.54(15℃)、-5.93(20℃)、-6.66(25℃)、-11.20(30℃)kJ·mol<'-1>；用擬二級方程對吸附過程進(jìn)行擬和，通過計算求得吸附反應(yīng)速率常數(shù)為0.00103g/mg.min； CG-6在固定床內(nèi)對凝血酶原復(fù)合物(PCC)溶液的吸附穿透行為的考察結(jié)果表明：流速、進(jìn)樣濃度和高徑比對PCC在CG-6上的吸附效率有著顯著影響，在考察范圍內(nèi)，隨著流速的下降，吸附效率從51.45％增加到73.98％，而

6、進(jìn)樣濃度的降低使吸附效率從32.14％增加到61.64％；高徑比的增加也會提高CG-6對PCC的吸附效率，但繼續(xù)增大高徑比則會降低樹脂的利用率。對CG-6吸附PCC機(jī)理的初步探討表明，CG-6樹脂帶有大量的離子交換基團(tuán)，而吸附PCC所需的比表面積和孔結(jié)構(gòu)并不占優(yōu)勢，因此，在CG-6吸附PCC過程中離子交換機(jī)理占有絕對的優(yōu)勢。通過對穿透過程中流出液pH值考察，表明CG-6在對PCC的吸附過程中孔結(jié)構(gòu)和比表面積并不占優(yōu)勢，吸附機(jī)理以離子交換

7、為主。 初步考察CG-6對血漿中對PCC的分離純化效果，并對洗脫樣進(jìn)行了活性測定，在0.8mol/L和1.2mol/L NaCl洗脫樣中PCC比活分別達(dá)到了0.383和1.08IU/mg，與原料血漿相比，PCC純化倍數(shù)可分別達(dá)到40倍和112倍，說明CG-6對血漿中的PCC有著較好的純化效果。 作為一種新型大孔陰離子交換樹脂，CG-6具有良好的蛋白吸附性能，可以作為一種蛋白質(zhì)純化分離介質(zhì)。通過對CG-6分離純化凝血酶原復(fù)