驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5在肝癌中的表達(dá)及其靶向藥物S-Trityl-L-Cysteine抗肝癌機(jī)制研究.pdf

1、目的:(1)檢測(cè)肝癌組織中驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5的表達(dá)及與肝癌臨床病理特征的相關(guān)性。(2)分析不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株中驅(qū)動(dòng)蛋白 Eg5的表達(dá)情況,探討其與腫瘤轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。(3)研究Eg5靶向藥物S-三苯甲基-L-半胱氨酸(S-Trityl-L-Cysteine,STLC)在不同轉(zhuǎn)移效能肝癌細(xì)胞系中的抗腫瘤效應(yīng)及其致凋亡的機(jī)制。
　　方法:(1)通過免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)肝癌組織中驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5的表達(dá)并分析其與肝癌臨床病理的相關(guān)性。(2

2、)運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株中驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5的表達(dá),RT-PCR的方法分析驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5 mRNA在有無門脈癌栓的肝癌組織及三種不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平,運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株中驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5的蛋白表達(dá)水平,分析其與肝癌轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性。(3)將肝癌細(xì)胞株MHCC97H分成不加藥組和不同劑量(1、5、10、50、100μmol/L)STLC加藥組分別作用24h,48h,

3、72h,MTT法檢測(cè)STLC對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制效應(yīng),運(yùn)用RT-PCR的方法檢測(cè)藥物處理前后MHCC97H細(xì)胞中細(xì)胞凋亡相關(guān)因子BIM和AIF mRNA的表達(dá)水平,免疫熒光雙染分析BIM和AIF在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核間轉(zhuǎn)移的情況,運(yùn)用比色法測(cè)定caspase3的活性。
　　結(jié)果:(1)免疫組織化學(xué)方法顯示Eg5主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中,Eg5在正常的肝臟組織中未見明顯表達(dá),在肝癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為62.3％(33/53),且與肝癌的腫瘤直徑(χ

4、2=10.162,P=0.002)、Edmondson分級(jí)(χ2=4.414,P=0.038)、pTNM分期(χ2=13.061, P=0.000)和有無門脈癌栓(χ2=4.098,P=0.041)有關(guān);而與患者性別、年齡、腫瘤包膜有無等指標(biāo)無明顯的相關(guān)性(P>0.05)。(2)免疫細(xì)胞化學(xué)示Eg5在MHCC97H、SMMC7721、HepG2三種肝癌細(xì)胞株中均表達(dá);其中MHCC97H表達(dá)最強(qiáng)、SMMC7721次之;HepG2表達(dá)最弱;

5、不同轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細(xì)胞株中Eg5 mRNA和蛋白表達(dá)量存在明顯差異,隨著細(xì)胞株轉(zhuǎn)移潛能的逐步增加Eg5表達(dá)量呈升高趨勢(shì): HepG2

6、及凋亡小體和細(xì)胞體積增大等典型有絲分裂災(zāi)變細(xì)胞凋亡現(xiàn)象;免疫熒光雙染顯示BIM和AIF存在細(xì)胞質(zhì)到細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移,RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)藥物作用48小時(shí)后BIM和AIF mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05),比色法檢測(cè)顯示藥物作用后caspase3的活性升高(P<0.05)。
　　結(jié)論:驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5在肝癌組織和肝癌細(xì)胞株中高表達(dá),其表達(dá)水平隨著肝癌轉(zhuǎn)移活性的提高而增強(qiáng),驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5可以作為腫瘤治療的新的靶點(diǎn)。靶向藥物S-Trity