MYCN siRNA納米脂質體對神經母細胞瘤骨髓、骨轉移模型的靶向效應.pdf

1、目的：建立神經母細胞瘤骨髓、骨轉移模型，探索以葉酸受體為靶向的納米脂質體包裹MYCN基因小干擾性RNA體內靶向性，探索以葉酸受體為靶向的納米脂質體包裹MYCN基因小干擾性RNA體內對瘤組織MYCN mRNA、MYCN蛋白表達水平及細胞凋亡的影響。
　　方法：1、4-6周齡雌性BALB/C裸鼠36只，從股骨遠端向骨髓腔注人神經母細胞瘤LA-N-5細胞懸液5μl(約1×105個細胞)制備神經母細胞瘤骨、骨髓轉移模型，觀察小鼠生存率、腫

2、瘤局部生長及遠處轉移情況。2、4只成功建立神經母細胞瘤骨髓、骨轉移模型的裸鼠，經靜脈給予CY3熒光標記的MYCN siRNA納米脂質體，劑量為3mg/kg，8h后處死，熒光顯微鏡檢測CY3在體內瘤組織及重要器官的熒光強度。3、12只成功建立神經母細胞瘤骨髓、骨轉移模型的裸鼠隨機MYCN siRNA組和無關siRNA組，靜脈分別給予MYCN siRNA納米脂質體與無關siRNA納米脂質體，劑量為3mg/Kg/天，連續(xù)給藥5天，于第6天處死

3、，取腫瘤組織，采用熒光定量PCR檢測腫瘤組織MYCN mRNA表達，Western blot檢測MYCN蛋白表達，原位細胞凋亡檢測法(TUNEL)觀察腫瘤細胞凋亡數。
　　結果：1、模型成瘤率100％，LA-N-5細胞進入骨髓腔后抑制正常骨髓細胞生長，向骨皮質侵襲性浸潤，形成骨溶解灶，并向淋巴結、肝、腎等部位轉移。2、CY3熒光標記的MYCN siRNA納米脂質體給藥8h后熒光主要分布在腫瘤組織內，肝臟、腎臟次之，心臟及肺臟及幾乎

4、沒有可見熒光。3、MYCN siRNA組瘤組織中MYCN mRNA的表達量明顯較無關siRNA組降低(P<0.05)，同時MYCN蛋白表達也下降，MYCN siRNA組凋亡細胞數量高于無關siRNA組(P<0.05)。
　　結論：1、股骨內注射人神經母細胞瘤LA-N-5細胞懸液可以成功制作裸鼠神經母細胞瘤骨、骨髓轉移模型，后者能較好模擬人神經母細胞瘤在骨骼微環(huán)境中的生長及轉歸情況，是研究神經母細胞瘤骨髓、骨轉移及評價臨床前靶向給藥