日本血吸蟲(chóng)Nanos樣蛋白基因的獲得、表達(dá)及初步鑒定.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的：獲得日本血吸蟲(chóng)Nanos樣蛋白基因的cDNA序列,克隆、表達(dá)和純化原核蛋白并初步鑒定。
　　方法：應(yīng)用PCR技術(shù),擴(kuò)增獲得日本血吸蟲(chóng) Nanos樣基因的完整開(kāi)放閱讀框(Open reading frame,ORF)。然后,將該基因亞克隆到原核表達(dá)載體pET28a(+),誘導(dǎo)表達(dá)并純化融合蛋白。用純化后的蛋白免疫家兔,制備該蛋白的多克隆抗體,分別用ELISA和Western blot對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行初步鑒定。
　　結(jié)果：同

2、源性分析表明,該基因?yàn)槿毡狙x(chóng)的一個(gè)新基因,其編碼序列的開(kāi)放閱讀框(ORF)為672bp,編碼223個(gè)氨基酸,理論相對(duì)分子量為25ku,PI為7.785。半定量RT-PCR技術(shù)分析顯示該基因在日本血吸蟲(chóng)的蟲(chóng)卵、尾蚴、童蟲(chóng)、雄性成蟲(chóng)和雌性成蟲(chóng)的蟲(chóng)體均有表達(dá),但在童蟲(chóng)、蟲(chóng)卵和雄蟲(chóng)的表達(dá)量明顯高于其他階段的量,并且雄蟲(chóng)的表達(dá)量明顯高于雌蟲(chóng)。成功構(gòu)建了該基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)-SjNanos,并在大腸埃希菌中獲得表達(dá),Weste

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