補腎中藥干預雷公藤多苷對原代培養(yǎng)卵巢顆粒細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的:本研究以補腎中藥菟絲子黃酮及六味地黃丸作為干預手段,以體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細胞作為研究對象,運用血清藥理學的方法,觀察補腎中藥干預雷公藤多苷(GTW)對原代培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細胞增殖、凋亡及分泌雌二醇的影響,從而探討雷公藤多苷對雌性生殖毒性的機制及補腎中藥的防護作用機理。為臨床安全有效的應用雷公藤多苷提供科學參考依據(jù)。
　　方法:3周齡的SD雌性幼鼠皮下注射PMSG(孕馬血清促性腺激素),48小時后脫臼處死大鼠,獲取卵巢顆粒

2、細胞。取4周齡SD雌性幼鼠,采用血清藥理學的方法,分別制備雷公藤多苷組、雷公藤多苷加六味地黃丸組、雷公藤多苷加菟絲子黃酮組含藥血清,并設空白組。卵巢顆粒細胞,預培養(yǎng)后分別與四組血清在體外共同培養(yǎng),收集培養(yǎng)液,用MTT法檢測其作用12h、24h、48h時對大鼠卵巢顆粒細胞增殖的影響;用放射免疫方法檢測其作用12h、24h、48h時大鼠卵巢顆粒細胞的雌二醇(E2)分泌量;采用SP法檢測其作用24h時對大鼠卵巢顆粒細胞Bcl-2蛋白表達。

3、r>　　結果:(1)放射免疫結果顯示,空白組與雷公藤多苷組分泌雌二醇比較,12h、24h無統(tǒng)計學意義(P>0.05),48h有極顯著性差異(P<0.01),12h、24h、48h中藥干預兩組均較雷公藤多苷組增加,黃酮組高于六味組,三個時點統(tǒng)計學分析,黃酮組與雷公藤多苷組相比有顯著性差異(P<0.05),六味組均值較雷公藤多苷組升高,統(tǒng)計學分析無顯著性差異(P>0.05);(2)OD值結果顯示,12h、24h、48h三個時點雷公藤多苷組O

4、D值最低,與空白組相比均有極顯著性差異(P<0.01);三個時點中藥干預各組OD均值較多苷組高,統(tǒng)計學分析黃酮組、六味組與雷公藤多苷組相比都有極顯著意義(P<0.01);(3)SP法檢測Bcl-2蛋白表達結果顯示,GTW組Bcl-2表達測值明顯少于空白組,統(tǒng)計學分析有極顯著性差異(P<0.01),提示雷公藤多苷組抑制Bcl-2表達。黃酮組、六味組Bcl-2表達與雷公藤多苷組相比均有極顯著性差異(P<0.01),且黃酮組表達較六味組有所增

5、強,兩組間統(tǒng)計學分析無顯著性差異(P>0.05)。
　　結論:雷公藤多苷對體外培養(yǎng)的卵巢顆粒細胞具有一定的影響。表現(xiàn)在上清液雌二醇分泌減少,細胞增殖能力的下降、促進細胞凋亡。菟絲子黃酮和六味地黃丸能明顯促進顆粒細胞增殖,有效的延緩了顆粒細胞的凋亡,從而對抗雷公藤多苷對卵巢顆粒細胞增殖的抑制及促進凋亡的作用。六味地黃丸對雷公藤多苷所致SD幼鼠生殖損傷的改善作用不明顯,菟絲子黃酮能明顯促進雌二醇的分泌,從而干預實驗性SD幼鼠雷公藤多苷