桂皮酸與Ndfipl聯(lián)合作用對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y及肝癌細(xì)胞7721增殖與凋亡的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 通過分別檢測(cè)不同濃度不同時(shí)間的桂皮酸對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y及肝癌細(xì)胞7721增殖及凋亡作用的影響，闡述中藥桂皮酸對(duì)上述兩種腫瘤細(xì)胞的作用；通過檢測(cè)桂皮酸聯(lián)合Ndfip1蛋白對(duì)上述兩種細(xì)胞增殖與凋亡的影響以及檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-9及Caspase-3的表達(dá)變化，初步探討桂皮酸與Ndfip1聯(lián)合作用的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.采用MTT法檢測(cè)不同濃度不同作用時(shí)間的桂皮酸單獨(dú)及聯(lián)

2、合Ndfip1對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y及肝癌細(xì)胞7721增殖作用的影響。
　　 2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度不同作用時(shí)間的桂皮酸單獨(dú)及聯(lián)合Ndfip1對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y及肝癌細(xì)胞7721凋亡作用的影響。
　　 3.采用Western blot檢測(cè)不同濃度不同作用時(shí)間的桂皮酸單獨(dú)及聯(lián)合Ndfip1對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y及肝癌細(xì)胞7721中凋亡相關(guān)蛋白Caspase-9及Caspase-3表達(dá)的影響。

3、　　 結(jié)果：
　　 1.桂皮酸及Ndfip1對(duì)細(xì)胞增殖的影響
　　 (1)桂皮酸的濃度設(shè)為0.5、1、2、4、8、15(mmol/L)，單獨(dú)作用于SY5Y細(xì)胞12h的抑制率分別為2.82、5.51、12.62、20.13、29.73、42.21(％)，聯(lián)合Ndfip1作用12h抑制率分別為0.77、3.71、8.38、16.68、22.59、33.95(％)，各濃度間兩兩比較生長(zhǎng)抑制率差異有顯著性(p<0.01)；桂皮

4、酸單獨(dú)作用24h的抑制率分別為12.89、22.23、31.26、37.07、50.77、60.81(％)，聯(lián)合Ndfip1作用24h抑制率分別為4.28、11.14、18.16、23.08、27.71、40.39(％)，各濃度間兩兩比較生長(zhǎng)抑制率差異有顯著性(p<0.01)；桂皮酸單獨(dú)作用48h的抑制率分別為13.05、32.77、58.27、67.39、73.8、80.43(％)，聯(lián)合Ndfip1作用48h抑制率分別為12.88、2

5、4.79、30.63、40.27、50.17、58.75(％)，各濃度間兩兩比較生長(zhǎng)抑制率差異有顯著性(p<0.01)。
　　 (2)桂皮酸的濃度設(shè)為0.5、1、2、4、8、15(mmol/L))單獨(dú)作用于7721細(xì)胞12h的抑制率分別為9.63、11.12、19.52、25.84、30.46、41.95(％)，聯(lián)合Ndfip1作用12h抑制率分別為12.51、26.53、34.19、40.26、48.47、55.04(％)，各

6、濃度間兩兩比較生長(zhǎng)抑制率差異有顯著性(p<0.01)；桂皮酸單獨(dú)作用24h的抑制率分別為17.23、30.5、36.15、41.77、51.44、65.73(％)，聯(lián)合Ndfip1作用24h抑制率分別為18.71、33.97、47.89、60.14、67.79、83.75(％)，各濃度間兩兩比較生長(zhǎng)抑制率差異有顯著性(p<0.01)；桂皮酸單獨(dú)作用48h的抑制率分別為22.94、31.3、40、59.94、70.68、89.15(％)，

7、聯(lián)合Ndfip1作用48h抑制率分別為32.11、53.58、66.51、75.47、89.69、95.97(％)，各濃度間兩兩比較生長(zhǎng)抑制率差異有顯著性(p<0.01)。
　　 2.桂皮酸及Ndfip1對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
　　 (1)桂皮酸單獨(dú)作用與聯(lián)合Ndfip1作用均能誘導(dǎo)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SY5Y凋亡，根據(jù)計(jì)算出的IC50值，桂皮酸單獨(dú)作用濃度設(shè)置為3mmol/L、7.5mmol/L、15mmol/L時(shí)，細(xì)胞特異

8、性凋亡率分別為19.01％、28.48％、38.00％；桂皮酸聯(lián)合Ndfip1濃度在3mmol/L、7.5mmol/L、15mmol/L細(xì)胞特異性凋亡率分別為13.91％、21.08％、29.35％，兩組比較轉(zhuǎn)染Ndfip1后的SY5Y在相同濃度桂皮酸作用下凋亡率明顯下降，差異有顯著性(p<0.01)。
　　 (2)桂皮酸單獨(dú)作用與聯(lián)合Ndfip1均能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞株7721凋亡，根據(jù)計(jì)算出的IC50值，桂皮酸單獨(dú)作用濃度設(shè)置為

9、3mmol/L、7.5mmol/L、15mmol/L時(shí)細(xì)胞特異性凋亡率分別為21.59％、30.31％、40.26％；桂皮酸聯(lián)合Ndfip1濃度在3mmol/L、7.5mmol/L、15mmol/L細(xì)胞特異性凋亡率分別為30.76％、40.86％、58.24％，兩組比較，轉(zhuǎn)染Ndfip1后的7721細(xì)胞在相同濃度桂皮酸作用下凋亡率明顯上升，差異有顯著性(p<0.01)。
　　 3.桂皮酸及Ndfip1對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Caspase

10、-9及Caspase-3表達(dá)的影響。
　　 桂皮酸濃度在3mmol/L、7.5mmol/L、15mmol/L時(shí)單獨(dú)作用于人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y和人肝癌細(xì)胞7721，隨著濃度增高或時(shí)間延長(zhǎng)，Caspase-9及Caspase-3的表達(dá)均增加；桂皮酸聯(lián)合Ndfip1蛋白作用于人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SY5Y細(xì)胞時(shí)，隨著濃度增高或時(shí)間延長(zhǎng)，Caspase-9及Caspase-3的表達(dá)水平低于桂皮酸單獨(dú)作用；桂皮酸聯(lián)合Ndfip1蛋白作用于人

11、肝癌細(xì)胞7721，隨著濃度增高或時(shí)間延長(zhǎng)，Caspase-9及Caspase-3的表達(dá)水平高于桂皮酸單獨(dú)作用。
　　 結(jié)論：
　　 1.桂皮酸單獨(dú)作用對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y的增殖具有抑制效應(yīng)，對(duì)其凋亡具有促進(jìn)作用，不同濃度不同時(shí)間作用效果具有顯著性差異；桂皮酸聯(lián)合Ndfip1蛋白作用時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率及凋亡率較單獨(dú)作用有明顯下降，說明Ndfip1可以拮抗桂皮酸對(duì)SY5Y細(xì)胞的促凋亡作用，這與Ndfip1對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具

12、有的保護(hù)作用有一定的關(guān)系。
　　 2.桂皮酸單獨(dú)作用對(duì)人肝癌細(xì)胞7721的增殖具有抑制效應(yīng)，對(duì)其凋亡具有促進(jìn)作用，不同濃度不同時(shí)間作用效果具有顯著性差異；桂皮酸聯(lián)合Ndfip1蛋白作用時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率及凋亡率較單獨(dú)作用有明顯上升，說明兩者的作用可能具有協(xié)同效應(yīng)。
　　 3.桂皮酸單獨(dú)作用于人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SY5Y和人肝癌細(xì)胞7721，可上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-9及Caspase-3的表達(dá)水平，表明桂皮酸促進(jìn)凋

13、亡作用的機(jī)制可能涉及到Caspase-9及Caspase-3相關(guān)的途徑；桂皮酸聯(lián)合Ndfip1作用于SH-SYSY細(xì)胞時(shí)，Cascase-9及Caspase-3的表達(dá)較桂皮酸單獨(dú)作用時(shí)減少，表明Ndfip1拮抗桂皮酸對(duì)SY5Y細(xì)胞的促凋亡作用影響Caspase-9及Caspase-3的表達(dá)水平；而桂皮酸聯(lián)合Ndfip1作用于7721細(xì)胞時(shí)，Cascase-9及Caspase-3的表達(dá)較桂皮酸單獨(dú)作用時(shí)增多，表明兩者促進(jìn)7721細(xì)胞凋亡的