rAAV2介導的靶向HIF-2α的siRNA增強胰腺癌細胞對健擇敏感性的實驗研究.pdf

1、目的：觀察攜帶靶向HIF-2α基因的shRNA的2型重組腺相關病毒對體外培養(yǎng)的人胰腺癌細胞增殖、凋亡作用及其對化療藥物健擇的增敏作用。 方法：將rAAV2-EGFP-U6- HIF-2α-siRNA轉染入人胰腺癌細胞株PANC-1中，以綠色熒光蛋白(GFP)基因為報告基因，用熒光顯微鏡儀和流式細胞觀察病毒轉染效率。分別在常氧和缺氧條件下培養(yǎng)細胞，用逆轉錄聚合酶連反應、免疫細胞化學法檢測PANC-1細胞HIF-2α mRNA和蛋白

2、表達，MTT法檢測不同濃度的化療藥物健擇對PANC-1細胞的增殖抑制作用，MTT法檢測缺氧條件下rAAV2-EGFP- U6-HIF-2α-siRNA聯(lián)合化療藥物健擇對PANC-1細胞增殖能力的影響，Annexin V-FITC/PI雙染檢測細胞凋亡。 結果：rAAV2-EGFP-U6-HIF-2α-siRNA被成功地轉染入PANC-1細胞中，F(xiàn)CM測定轉染效率在40％左右。與陰性對照組和空白對照組比較，實驗組PANC-1細胞的

3、HIF-2α mRNA和蛋白的表達明顯受到抑制。不同濃度的健擇(0.25μ g/mL-4μ g/mL)作用48小時后均對細胞增殖有抑制作用，并隨劑量的增加抑制率逐漸增大(F=859.054，P<0.05)，相同藥物濃度下，常氧下的細胞抑制率大于缺氧條件下的細胞抑制率(F=219.471，P<0.05)。在缺氧狀態(tài)下，聯(lián)合組對PANC-1細胞的生長抑制率顯著高于單純轉染組和單用健擇組，差異均有統(tǒng)計學意義(F=39.279，P<0.05)，