沉默VDR基因影響胰腺癌PANC-1細胞對骨化三醇敏感性的實驗研究.pdf

1、目的:
　　本文通過研究骨化三醇作用于VDR基因沉默前后的胰腺癌PANC-1細胞，檢測細胞凋亡和周期阻滯情況以及與凋亡和周期調(diào)節(jié)相關(guān)基因地表達變化，評價VDR基因表達對骨化三醇抗胰腺癌的影響，并進一步探討相關(guān)作用機制。
　　方法:
　　予以不同濃度骨化三醇處理胰腺癌PANC-1細胞，采用MTT比色法分別于作用24h、48h、72h后檢測細胞的增殖情況，并篩選出合適地用藥時間與濃度;設計并合成三組VDR-siRNA，按說

2、明書利用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染PANC-1細胞，并從中篩選出沉默效率最佳者;Hoechst33258熒光染色法觀察VDR基因沉默前后骨化三醇作用下細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變;流式細胞儀檢測細胞調(diào)亡和細胞周期阻滯情況;蛋白免疫印跡法(Western Blot)和逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈式反應法(Rt-PCR)檢測凋亡、細胞周期相關(guān)基因(Caspase-3，Bcl-2，Bax，p21，p27)的表達變化。
　　結(jié)果:
　　

3、骨化三醇對胰腺癌PANC-1細胞的增殖具有顯著地抑制作用，且有時間、劑量依賴性。骨化三醇濃度在50nM時對PANC-1細胞地抑制效果最佳，細胞活性顯著降低。經(jīng)siRNA-VDR-1103轉(zhuǎn)染的PANC-1細胞VDR基因表達降低近91％。Hoechst33258染色、流式細胞儀檢測均顯示骨化三醇50nM干預24h可明顯誘導胰腺癌PANC-1細胞的凋亡和G0/G1期阻滯，干預48h后結(jié)果更顯著;VDR基因沉默后作用效果明顯降低。Wester

4、n Blot結(jié)果顯示，骨化三醇干預胰腺癌PANC-1細胞后Bax/Bcl-2比值變化不明顯，Caspase-3、p21和p27蛋白表達均明顯上調(diào);VDR基因沉默后，隨著骨化三醇干預Bax/Bcl-2比值反而較對照組降低，Caspase-3、p21和p27表達量也明顯降低，且隨著骨化三醇作用變化不明顯。Rt-PCR同樣佐證了上述結(jié)果。
　　結(jié)論:
　　1.骨化三醇可以誘導胰腺癌PANC-1細胞株的凋亡，促使細胞周期阻滯于G0/