RNA干擾β-catenin對(duì)大腸腺癌細(xì)胞SW480生長(zhǎng)及基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的:以β-catenin為靶向，化學(xué)合成siRNA轉(zhuǎn)染大腸腺癌細(xì)胞SW480，觀察其對(duì)β-cateninmRNA表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響。了解其對(duì)SW480細(xì)胞生長(zhǎng)作用的影響。 方法:以β-catenin為靶向，化學(xué)合成三條不同的siRNA鏈，將合成的三條siRNA鏈及無(wú)意義鏈分別用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞，分組為siRNAl試驗(yàn)組、siRNA2試驗(yàn)組、siRNA3試驗(yàn)組、陰性對(duì)照組(無(wú)意義鏈組)、空白對(duì)照組五組；應(yīng)用四甲

2、基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測(cè)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)三個(gè)時(shí)段SW480細(xì)胞增殖狀態(tài)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染作用后48小時(shí)SW480細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期變化。利用熒光定量PER法(探針)測(cè)定siRNA轉(zhuǎn)染作用后48小時(shí)β-catenin mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果: 1．MTT法檢測(cè)： siRNA1試驗(yàn)組、siRNA2試驗(yàn)組、siRNA3試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，SW480細(xì)胞增殖抑制率均明顯增高

3、，其中，siRNA1試驗(yàn)組、siRNA3試驗(yàn)組增殖抑制率比siRNA2試驗(yàn)組高，siRNA1、siRNA3對(duì)靶基因的特異性優(yōu)于siRNA2。研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)各組增殖抑制率具有時(shí)間依賴性，隨時(shí)間延長(zhǎng)，增值抑制率均有不同程度增高。 2．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)：siRNA轉(zhuǎn)染作用后48小時(shí)siRNA1試驗(yàn)組、siRNA2試驗(yàn)組、siRNA3試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，SW480細(xì)胞凋亡率明顯增高。其中siRNA1試驗(yàn)組、siRNA3試驗(yàn)組

4、的凋亡率比siRNA2試驗(yàn)組高，說(shuō)明前兩組siRNA干擾抑制作用比后者強(qiáng)。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)siRNA1試驗(yàn)組、siRNA2試驗(yàn)組、siRNA3試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，細(xì)胞周期阻滯在G1期，G1期延長(zhǎng)，S期縮短。 3．熒光定量PCR法(探針)檢測(cè)：siRNA轉(zhuǎn)染作用后48小時(shí)siRNAl試驗(yàn)組、siRNA2試驗(yàn)組、siRNA3試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，β-catenin mRNA的表達(dá)明顯降低。siRNAl試驗(yàn)組、s