EGFR基因多態(tài)性與肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及特羅凱在肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移性胸腔積液中的應(yīng)用.pdf

1、第一部分，EGFR基因多態(tài)性與肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移的相關(guān)性
　　 背景與目的:進(jìn)展期肺癌，尤其是中晚期肺腺癌，經(jīng)常發(fā)生胸膜轉(zhuǎn)移，甚至導(dǎo)致惡性胸腔積液的出現(xiàn)。迄今為止，肺癌發(fā)生胸膜轉(zhuǎn)移的機制不是很清楚，有關(guān)肺癌發(fā)生胸膜轉(zhuǎn)移的分子機制鮮有報道。以前的研究結(jié)果表明，表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)信號系統(tǒng)控制著多種細(xì)胞的增殖、分化、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，EGFR的異常過度表達(dá)在多種腫

2、瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等方面起著至關(guān)重要的作用。研究進(jìn)一步表明，EGFR的表達(dá)與EGFR基因的多態(tài)性、突變、基因擴(kuò)增甚至種族等因素密切相關(guān)。為探討EGFR基因多態(tài)性對肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移的影響，揭示EGFR的表達(dá)與EGFR基因多態(tài)性之間的相關(guān)性，進(jìn)一步揭示EGFR基因多態(tài)性與肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移的內(nèi)在聯(lián)系，設(shè)計并開展了本項研究。
　　 方法:選取424名無胸膜轉(zhuǎn)移的Ⅳ期肺腺癌患者和432名肺腺癌并胸膜轉(zhuǎn)移患者作為研究對象，同時收集每例患

3、者外周靜脈血及肺腺癌組織（外科手術(shù)切除或經(jīng)纖維支氣管鏡鉗?。?jīng)外周靜脈血DNA提取及聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)，應(yīng)用毛細(xì)管電泳(CapilaryElectrophoresis，CE)和DNA測序分析方法，檢測表皮生長因子受體內(nèi)含子1簡單重復(fù)序列(CA-SSR1)基因多態(tài)性分布;應(yīng)用PCR技術(shù)和直接測序方法檢測EGFR基因-216G/T和R497K基因多態(tài)性分布;應(yīng)用免疫組化法和實時熒光定量P

4、CR法(Real-timepolymerasechainreaction，RT-PCR)分別從蛋白水平和mRNA水平探討EGFR基因CA-SSR1、-216G/T和R497K不同多態(tài)性基因型相應(yīng)患者肺腺癌組織及外周靜脈血中EGFR的不同表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.兩組之間CA-SSR1、-216G/T和R497K在基因型和等位基因分布頻率方面有顯著性差異:與長CA重復(fù)序列、Lys等位基因和-216G等位基因相比，短CA重復(fù)序列、Ar

5、g等位基因和-216T等位基因具有更高的胸膜轉(zhuǎn)移風(fēng)險。2.短CA重復(fù)序列、-216T/T和-216G/T以及Arg/Arg基因型患者比長CA重復(fù)、-216G/G、Arg/Lys以及Lys/Lys基因型患者有著更高的EGFR表達(dá)。結(jié)論:1.EGFR表達(dá)與EGFR基因CA-SSR1、-216G/T和R497K多態(tài)性密切相關(guān)。
　　 2.EGFR基因CA-SSR1、-216G/T和R497K多態(tài)性是肺腺癌發(fā)生胸膜轉(zhuǎn)移的高風(fēng)險因子，該風(fēng)

6、險因素可能與EGFR基因CA-SSR1、-216G/T和R497K多態(tài)性影響EGFR表達(dá)密切相關(guān)。
　　 第二部分，特羅凱在治療肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移性胸腔積液中的應(yīng)用
　　 背景與目的:肺癌一旦發(fā)生胸膜轉(zhuǎn)移，甚至伴有惡性胸腔積液的形成，按2009年IASLC（國際肺癌研究協(xié)會）肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)志著病變已經(jīng)進(jìn)展至第Ⅳ期，治療上已基本失去外科手術(shù)指征，且大多數(shù)患者因一般狀況及耐受性差等原因，一線化療大多不能正常進(jìn)行，而其他治

7、療措施療效也均不理想。近年來，生物分子靶向治療的基礎(chǔ)及臨床研究蓬勃發(fā)展，其中以EGFR為靶點的小分子酪氨酸激酶抑制劑如吉非替尼(易瑞沙，Iressa)和厄洛替尼(特羅凱，Tarceva)以及以抑制腫瘤血管生成為靶點的藥物如貝伐單抗(Avastin)等靶向治療，成為目前晚期肺癌尤其是晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)治療的熱點。研究結(jié)果表明，EGFR基因突變與NSCLC病人對EGFR酪氨酸激酶抑制劑的敏感性密切相關(guān)。與酪氨酸激酶抑制劑敏感性相

8、關(guān)的EGFR基因突變，大多發(fā)生在EGFR基因編碼酪氨酸激酶區(qū)的18～21號外顯子。既往研究結(jié)果顯示，EGFR基因酪氨酸激酶區(qū)的18～21號外顯子基因突變，除極個別突變，如外顯子19的D761Y及外顯子20的T790M為原始耐藥（具體機制不詳）突變外，其余突變類型患者對EGFR酪氨酸激酶抑制劑反應(yīng)良好，而該區(qū)無突變患者對EGFR酪氨酸激酶抑制劑反應(yīng)差。為揭示肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移患者EGFR基因突變以及EGFR基因突變與特羅凱治療肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移性

9、胸腔積液療效之間的相關(guān)性，尋找治療肺癌胸膜轉(zhuǎn)移性胸腔積液更加有效的治療措施，我們設(shè)計并開展了此項研究。
　　 方法:選取128例肺腺癌并胸膜轉(zhuǎn)移性胸腔積液患者作為研究對象。每例患者，首先經(jīng)電視胸腔鏡檢查，獲取胸膜病變組織，繼之在電視胸腔鏡直視下充分吸引清除胸腔積液，行滑石粉胸膜閉鎖術(shù)，術(shù)后給予胸膜腔內(nèi)置管，安返病房后，連接簡易負(fù)壓吸引裝置，行胸膜腔負(fù)壓吸引及閉式引流。對于病理檢查確診為肺腺癌并胸膜轉(zhuǎn)移患者，在征得患者或其家屬同意

10、后，給予特羅凱口服(150mg/d)行靶向治療。留取的部分胸膜活檢組織，經(jīng)組織DNA提取、EGFR基因突變檢測等相關(guān)研究方法，首先確定EGFR基因突變與否，根據(jù)EGFR基因突變檢測結(jié)果，將納入本研究的觀察對象分為基因突變組和非突變組，結(jié)合臨床資料及胸部CT等輔助檢查，探討EGFR基因突變與特羅凱臨床療效之間的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:胸膜轉(zhuǎn)移組織中EGFR基因突變檢出率高于以前報道的手術(shù)切除標(biāo)本、血漿標(biāo)本、胸腔積液等標(biāo)本中EGFR基

11、因突變檢出率;治療4周后，基因突變組和非突變組在平均拔管時間、胸腔積液引流量、Karnofsky評分及形成包裹性積液等方面有顯著性差異(P＜0.01)，在基因突變組，形成中度胸膜肥厚患者數(shù)明顯高于非突變組(P＜0.01)，而重度胸膜肥厚患者數(shù)明顯低于非突變組(P＜0.05);CEA和TPA改善方面，兩組之間有顯著性差異(P＜0.05)。中位綜合生存時間，基因突變組明顯高于非突變組。
　　 結(jié)論:1.經(jīng)電視胸腔鏡獲取的肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)

12、移組織中EGFR基因突變檢出率高，采取本方法檢測患者EGFR基因突變，假陰性率低，較外科手術(shù)切除的肺腺癌組織標(biāo)本、外周血及胸腔積液等標(biāo)本，結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。2.特羅凱治療肺腺癌轉(zhuǎn)移性胸腔積液的臨床療效與患者的EGFR基因突變密切相關(guān)，EGFR基因突變檢測可作為特羅覬治療惡性胸腔積液的應(yīng)用與否的決定性指標(biāo)。3.胸膜腔閉鎖術(shù)結(jié)合胸膜腔負(fù)壓吸引閉式引流聯(lián)合特羅凱綜合治療肺腺癌胸膜轉(zhuǎn)移性胸腔積液，是目前較為理想、實用的治療措施，可廣泛應(yīng)用于臨床