煙草懸凝物對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞急性毒性損傷的研究及慢性遺傳性損傷過程中survivin表達(dá)的研究.pdf

1、目的：通過研究煙草懸凝物(CSC)對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞(BEP-2D)急性毒性及慢性遺傳性毒性損傷的相關(guān)機(jī)制，探討香煙煙氣在人支氣管上皮細(xì)胞損傷過程中的生物學(xué)作用，以期為新的肺癌診斷方法和防治措施提供理論依據(jù)。 方法： 1.收集某品牌香煙煙氣并溶解于LHC-8培養(yǎng)液制備成CSC。 2.CSC對(duì)BEP-2D細(xì)胞的急性毒性損傷：用四唑鹽(MTT)比色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞存活率，檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(LDH)相對(duì)活性以評(píng)估細(xì)

2、胞膜損傷，細(xì)胞凋亡率檢測(cè)，利用凋亡細(xì)胞具6-硫代鳥嘌呤(6-TG)抗性檢測(cè)細(xì)胞HPRT基因突變。 3.CSC對(duì)BEP-2D細(xì)胞的慢性遺傳性毒性損傷：取對(duì)照組(未染毒BEP-2D細(xì)胞)及實(shí)驗(yàn)組(CSC染毒的BEP-2D細(xì)胞)作為研究對(duì)象，采用半定量反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)各組細(xì)胞中survivin基因，同時(shí)用免疫組化法檢測(cè)各組中survivin蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.在急性毒性損傷過程中，隨著CSC濃度的

3、逐漸增加：①細(xì)胞存活率逐步下降；②細(xì)胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(LDH)逐漸且明顯增多；③CSC作用2h后，細(xì)胞的早期和晚期凋亡率均增大，與染毒劑量具有明顯劑量-效應(yīng)關(guān)系；④HPRT基因突變逐漸增大。 2.在慢性遺傳性損傷過程中：survivin mRNA在對(duì)照組細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度僅為0.08，在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞P15、P25和P38中分別為0.56、0.80和0.81；survivin蛋白在對(duì)照組細(xì)胞中表達(dá)陰性，在實(shí)驗(yàn)組不同代細(xì)胞中均表達(dá)陽性