煙草懸凝物對人支氣管上皮細胞急性毒性損傷的研究及慢性遺傳性損傷過程中survivin表達的研究.pdf

1、目的：通過研究煙草懸凝物(CSC)對人支氣管上皮細胞(BEP-2D)急性毒性及慢性遺傳性毒性損傷的相關機制，探討香煙煙氣在人支氣管上皮細胞損傷過程中的生物學作用，以期為新的肺癌診斷方法和防治措施提供理論依據(jù)。 方法： 1.收集某品牌香煙煙氣并溶解于LHC-8培養(yǎng)液制備成CSC。 2.CSC對BEP-2D細胞的急性毒性損傷：用四唑鹽(MTT)比色實驗檢測細胞存活率，檢測細胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(LDH)相對活性以評估細

2、胞膜損傷，細胞凋亡率檢測，利用凋亡細胞具6-硫代鳥嘌呤(6-TG)抗性檢測細胞HPRT基因突變。 3.CSC對BEP-2D細胞的慢性遺傳性毒性損傷：取對照組(未染毒BEP-2D細胞)及實驗組(CSC染毒的BEP-2D細胞)作為研究對象，采用半定量反轉錄PCR(RT-PCR)檢測各組細胞中survivin基因，同時用免疫組化法檢測各組中survivin蛋白的表達。 結果： 1.在急性毒性損傷過程中，隨著CSC濃度的

3、逐漸增加：①細胞存活率逐步下降；②細胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(LDH)逐漸且明顯增多；③CSC作用2h后，細胞的早期和晚期凋亡率均增大，與染毒劑量具有明顯劑量-效應關系；④HPRT基因突變逐漸增大。 2.在慢性遺傳性損傷過程中：survivin mRNA在對照組細胞中的表達強度僅為0.08，在實驗組細胞P15、P25和P38中分別為0.56、0.80和0.81；survivin蛋白在對照組細胞中表達陰性，在實驗組不同代細胞中均表達陽性