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文檔簡介
1、目的:通過研究煙草懸凝物(CSC)對人支氣管上皮細胞(BEP-2D)急性毒性及慢性遺傳性毒性損傷的相關機制,探討香煙煙氣在人支氣管上皮細胞損傷過程中的生物學作用,以期為新的肺癌診斷方法和防治措施提供理論依據(jù)。 方法: 1.收集某品牌香煙煙氣并溶解于LHC-8培養(yǎng)液制備成CSC。 2.CSC對BEP-2D細胞的急性毒性損傷:用四唑鹽(MTT)比色實驗檢測細胞存活率,檢測細胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(LDH)相對活性以評估細
2、胞膜損傷,細胞凋亡率檢測,利用凋亡細胞具6-硫代鳥嘌呤(6-TG)抗性檢測細胞HPRT基因突變。 3.CSC對BEP-2D細胞的慢性遺傳性毒性損傷:取對照組(未染毒BEP-2D細胞)及實驗組(CSC染毒的BEP-2D細胞)作為研究對象,采用半定量反轉錄PCR(RT-PCR)檢測各組細胞中survivin基因,同時用免疫組化法檢測各組中survivin蛋白的表達。 結果: 1.在急性毒性損傷過程中,隨著CSC濃度的
3、逐漸增加:①細胞存活率逐步下降;②細胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(LDH)逐漸且明顯增多;③CSC作用2h后,細胞的早期和晚期凋亡率均增大,與染毒劑量具有明顯劑量-效應關系;④HPRT基因突變逐漸增大。 2.在慢性遺傳性損傷過程中:survivin mRNA在對照組細胞中的表達強度僅為0.08,在實驗組細胞P15、P25和P38中分別為0.56、0.80和0.81;survivin蛋白在對照組細胞中表達陰性,在實驗組不同代細胞中均表達陽性
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