煙草懸凝物誘導(dǎo)永生化人支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中p16基因甲基化的研究.pdf

1、目的：研究煙草懸凝物（cigarette smoke condensate，CSC）誘導(dǎo)永生化人支氣管上皮細(xì)胞（immortalized human bronchial epithelial cells，BEP-2D cells）細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中p16基因甲基化的變化，以探討吸煙致肺癌發(fā)生機(jī)制，為防治吸煙致肺癌提供理論依據(jù)。 方法：將BEP-2D細(xì)胞分為對照組細(xì)胞（BEP-2D cells）及實驗組細(xì)胞（BEP-2DCSC c

2、ells）；通過MTT實驗及細(xì)胞克隆形成實驗確定慢性誘導(dǎo)物CSC最佳誘導(dǎo)劑量，并以此劑量誘導(dǎo)BEP-2D細(xì)胞慢性惡性轉(zhuǎn)化，用巢式PCR（nested-methylation-specific PCR，nested-PCR）方法檢測其惡性轉(zhuǎn)化過程中p16基因甲基化的情況。 結(jié)果：1.MTT實驗結(jié)果示CSC濃度在2.0μl/ml及以下時，24h、48h及72h細(xì)胞存活率均大于50％；細(xì)胞克隆形成實驗結(jié)果示CSC濃度在2.0μl/ml

3、及以下時細(xì)胞克隆形成率降低不明顯。2.CSC誘導(dǎo)BEP-2D細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化模型的建立：①實驗組P25細(xì)胞血清抗性顯著增強(qiáng)；②實驗組P38細(xì)胞具有錨著獨立生長特性；③實驗組P38細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤，病理組織學(xué)為中分化鱗形細(xì)胞癌。3.對照組細(xì)胞p16基因甲基化無表達(dá)，而在實驗組P15、P25、P38、P43細(xì)胞都有表達(dá)，同時P15、P25、P38、P43細(xì)胞p16基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平均降低。 結(jié)論：1.CSC對BEP-2D細(xì)胞最佳誘導(dǎo)