貴州優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)茯苓菌株分離純化篩選及應(yīng)用研究.pdf

1、真菌茯苓(Wolfiporia cocos(Schwein．)Ryvarden et Gilbn．)的干燥菌核，是我國珍貴的傳統(tǒng)中藥材。茯苓的藥用價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值極高，保健作用獨(dú)特，經(jīng)濟(jì)價(jià)值可觀，應(yīng)用前景廣闊。 本試驗(yàn)對采自貴州的10個野生茯苓菌核和3個人工栽培茯苓菌核進(jìn)行組織分離，對所得分離菌株進(jìn)行菌絲形態(tài)及熒光核染色顯微觀察；篩選適合其生長的最適母種、原種培養(yǎng)基。以13個茯苓野生及人工栽培菌核分離株、中國微生物菌種保管委員會收

2、錄菌株(6株)以及國內(nèi)主栽品種(4株)作為試驗(yàn)對象，對其進(jìn)行菌絲生長初篩、原種培養(yǎng)復(fù)篩，篩選出黎13、臺17、劍19、劍20號4個優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌株，這4個菌株在野外栽培生產(chǎn)試驗(yàn)中發(fā)菌情況良好，采收后測定菌核總重/蔸、結(jié)苓個數(shù)/蔸、最大個苓重、單蔸最高產(chǎn)量等產(chǎn)量指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于對照中5號菌株，結(jié)苓率為100％，4株菌株個苓形狀規(guī)則，肉質(zhì)純白，無砂苓，無跑苓現(xiàn)象，結(jié)實(shí)程度(比重)較好，具有結(jié)苓性能好、產(chǎn)量高、質(zhì)量好等特點(diǎn)。對上述4個

3、優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌株進(jìn)行遺傳特性鑒定，結(jié)果顯示其遺傳穩(wěn)定。在上述試驗(yàn)基礎(chǔ)上建立優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌株篩選模型，為今后茯苓菌株選優(yōu)及生產(chǎn)研究等提供現(xiàn)實(shí)依據(jù)。 測定供試菌株在木屑培養(yǎng)基上的生長速率及其向木屑培養(yǎng)基中分泌的CMC酶活力，并對兩者進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)為0.951977，表明兩者間具有一定的相關(guān)性。但測定濾紙酶活力為陰性。 本試驗(yàn)利用RAPD技術(shù)對23株供試菌株進(jìn)行引物篩選，從41條引物中篩選了17條對供試菌株擴(kuò)增重復(fù)性好、譜帶

4、清晰，具有一定多態(tài)性的引物，進(jìn)而對10株外來菌株和貴州道地茯苓菌核分離株進(jìn)行遺傳分析和鑒定，通過數(shù)據(jù)分析建立無根樹，探討其親緣關(guān)系。RAPD分析結(jié)果顯示不同來源的茯苓菌株親緣關(guān)系非常相近，但在某些引物的擴(kuò)增物上存在較小的差異，所得聚類結(jié)果與23株菌株形態(tài)特征的鑒定結(jié)果基本一致。這表明采用RAPD技術(shù)對茯苓菌株的聚類分析有助于這些菌株親緣關(guān)系及同源性的研究，可為道地茯苓的檢測、鑒定提供分子生物學(xué)依據(jù)。 通過比較兩種保藏方法、不同保